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目的:1、研究NOX4对NSCLC细胞增殖的作用;2、探索NOX4调控NSCLC细胞增殖的分子机制。方法:1、免疫组织化学法采用免疫组织化学技术检测152例NSCLC病人癌组织及癌旁组织中NOX4及p-Akt蛋白阳性率表达情况,并分析NOX4与临床分期的相关性。2、MTT法用pCMV-NOX4、pRS-shNOX4、pcDNA3.1-Akt载体构建NOX4稳定过表达、NOX4稳定缺失、Akt过表达的A549和H460细胞,并将其接种于96孔板后检测细胞的增殖能力。3、细胞集落形成实验NOX4过表达、NOX4缺失、Akt过表达的A549和H460细胞种板后培养14天,检测并比较NSCLC细胞的集落形成能力。4、成瘤实验将NOX4过表达、NOX4缺失的A549和H460细胞悬液无菌皮下注射注入裸鼠体内,每隔一天观察并测量瘤体大小,记录瘤体的变化。5、蛋白免疫印迹验证NSCLC细胞系中NOX4蛋白表达水平的高低,并检测NOX4过表达的NSCLC稳转株中p-Akt、Akt的表达水平。结果:1、对NSCLC病人临床标本分析得出,NOX4上调与NSCLC的临床分期及预后(P<0.001)密切相关,且NOX4在人NSCLC癌组织中的表达显著高于癌旁正常肺组织,经比较差异具有统计学意义(P<0.05)。2、体内外实验证明,与对照组相比,NOX4过表达促进NSCLC细胞的增殖和肿瘤的生长,NOX4缺失抑制NSCLC细胞的增殖和肿瘤的生长。3、阻断PI3K/Akt通路能有效逆转NOX4过表达促进NSCLC细胞增殖的作用。当使用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002或Wartmannin时,NOX4促进NSCLC细胞增殖的作用被逆转;与对照组相比,NOX4过表达能使A549和H460细胞中磷酸化Akt活性增强,NOX4缺失能使A549和H460细胞中磷酸化Akt活性降低(P<0.05);经过分析152例NSCLC病人临床标本得出,在肺腺癌和肺鳞癌中,NOX4高表达与p-Akt的表达密切相关(P<0.05);对NOX4过表达的A549和H460细胞荷瘤鼠给予LY294002,结果表明经给药后所形成的肿瘤比NOX4过表达组明显减小。4、在NSCLC细胞系中Akt和NOX4能相互激活并促进细胞增殖。在A549和H460细胞中,抑制Akt后,NOX4的表达量下调;A549和H460细胞转染Akt过表达质粒后,NOX4的表达上调;当NOX4与Akt均过表达时促进NSCLC细胞增殖作用比对照组强(P<0.05)。结论:1、在NSCLC病人病理标本中NOX4表达量显著增高;2、NOX4过表达会促进NSCLC细胞的增殖;3、PI3K/Akt通路激活参与NOX4调控NSCLC细胞的增殖作用;4、NOX4和PI3K/Akt通路相互激活并促进NSCLC细胞增殖。