糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一种全身系统性疾病，其慢性并发症几乎可涉及全身各组织。一般认为，多元醇代谢异常、终末糖化产物增多、蛋白激酶C激活、己糖胺通路活性增强是DM并发症发生的4种主要分子机制。2001年Brownlee提出DM并发症的共同机制学说，即线粒体损伤可能使得上述4条通路被激活，从而导致DM各项并发症的发生。自此之后，有关DM线粒体机能的研究迅速开展起来。诸多不同部位、不同方面针对DM患者线粒体机能的研究都证实了这一学说，即线粒体功能改变是DM并发症的发展的中心环节。但尽管研究众多，其机制仍然没有得出最终结论。　　 DM患者血小板功能的改变在DM血管并发症的发展中起到重要作用，然而涉及血小板线粒体机能的研究很少。在前期研究中，我们发现DM患者血小板的线粒体膜电位较正常人低，但线粒体ATP含量较正常人高。膜电位是反映线粒体功能的敏感指标，膜电位下降说明线粒体机能受到一定程度的损伤，我们考虑，线粒体膜电位下降致使合成的ATP不能顺利转运出而在线粒体内聚积，进而影响到整个细胞的生命活动。如同机体的其他部位，高血糖长期作用下，血小板线粒体机能也同样会受到损伤。　　 血小板是无核细胞，其他细胞器完整，以血小板为对象研究线粒体机能可减少实验因素对核DNA的作用而带来的干扰，更为直接的观察实验因素对线粒体的作用。并且血小板取材非常方便，使用血小板作为研究对象整个实验流程简化不少。所以我们考虑对血小板线粒体进行更进一步的试验，研究体外高糖对血小板线粒体机能的影响。探讨是否能建立新的、快捷的实验模型，从血小板线粒体本身的特性延伸到线粒体机能共性方面，探讨高糖对线粒体机能的影响、分子机制，以及药物治疗效果等，为DM患者体线粒体机能的相关研究提供理论基础。　　 目的：观察糖对Sprague Dawley(SD)大鼠体外血小板线粒体机能的影响和2型糖尿病患者血小板线粒体机能的变化，拟建立糖尿病血小板线粒体机能退变观察模型。　　 方法：使用流式细胞仪测量血小板线粒体膜电位(血小板△Ψm)，MTT法检测血小板活力，采用血细胞计数板对血小板计数，透射电镜观察血小板超微结构。　　 观察不同浓度葡萄糖对SD大鼠(2月龄，雌雄各半，体重180～200g，共30只)血小板线粒体机能的影响：(1)采用自身对照研究，将10只SD大鼠血小板加入5、15和30mmol/L的葡萄糖溶液，比较3组血小板在37度下静置2、24h的血小板△Ψm、血小板活力，以选择对体外血小板影响最为明显的葡萄糖浓度。(2)高糖组和对照组血小板分别在4℃和37℃下静置，观察在2、6、10、24和72h这4个时间点两组血小板△Ψm、血小板活力和血小板数量，找出变化最明显的时间点。(3)比较4℃和37℃两个温度下，高糖组和对照组的血小板△Ψm。　　 对比2型DM患者和健康成人的血小板线粒体机能：(1)提取2型DM患者10人(DM组)，健康成人10人(对照组)的血小板，将两组血小板分别在4℃和37℃下静置，测定2h、24h的血小板△Ψm、血小板活力和血小板数量。(2)透射电镜观察2型DM患者和健康成人的血小板线粒体结构。　　 结果：动物体外血小板线粒体观察结果：(1)血小板计数显示，高糖组(30mmol/L)和对照组(5mmol/L)血小板在4℃放置72h后，两组血小板数量均随时间减少，在2、24、48、72h4个时间点两组血小板数量的差异无统计学意义。(2)SD大鼠血小板分别放入5、15、30mmol/L葡萄糖溶液中在37℃下静置24h后，30mmol/L组血小板△ψm明显高于其他2组(3.1％比1.0％和0.9％，P＜0.01)。15和30mmol/L组血小板活力高于5mmol/L组(0.27±0.05和0.27±0.02比0.21±0.02，均P=0.029)(3)体外血小板线粒体膜电位随时间变化的趋势图可见：37℃下，高糖组和对照组在24h内血小板△Ψm下降到一定程度后趋于平缓；而置于4℃时，24h内血小板△Ψm先下降后升高。(4)不论高糖组还是对照组，置于4℃的血小板△Ψm均高于37℃的，但只有高糖组在静置24h后4℃和37℃下的膜电位差异有统计学意义(7.6％比3.1％，P=0.000)。(5)4℃下高糖组和对照组血小板活力均随时间下降，两组间差异无统计学意义。　　 DM患者和健康人体外血小板观察结果：(1)计数结果显示，DM患者和健康人血小板在体外4℃放置72h，血小板数量(×109/L)随时间减少，至第48、72h时，DM组血小板数量明显少于对照组(71.3±18.9比123.8±18.9，F=15.474，P=0.008；67.5±13.2比135±10.8，F=62.5，P=0.000)。(2)DM患者和健康人血小板在37℃静置24h后，两组血小板△Ψm差异无统计学意义。而4℃静置24h后，糖尿病患者血小板△Ψm明显低于健康人(5.2％比26.5％，P＜0.01)。(3)电镜下可见，糖尿病患者血小板线粒体形态改变，胞内糖原聚集，线粒体肿胀，线粒体嵴断裂。　　 结论：　　 (1)动物体外血小板线粒体观察结果提示，短期内高糖可使血小板线粒体活性增高，表现为线粒体膜电位和细胞活力增高，但对血小板数量影响不大。　　 (2)DM患者的血小板在高血糖长期作用下，线粒体机能受损，在体外对低温等刺激耐受能力下降。并且线粒体的超微结构也发生改变。　　 总之，高糖对血小板的线粒体短期作用表现为提高其活性，长期作用不但会损伤血小板线粒体功能，并且可破坏线粒体超微结构。