原发性肝细胞癌(以下简称“肝癌”)是一种严重危害我国人民健康的恶性肿瘤。极易转移复发是影响肝癌患者预后的主要因素,而探索肝癌侵袭转移机制是从根本上改善患者预后的关键。骨桥蛋白(osteopontin, OPN),作为一个多功能的钙结合磷酸化糖蛋白,通过与整合素或CD44结合,参与细胞粘附、信号传导、运动等重要的生物学过程。近年来研究表明,该蛋白除了在骨形成、血管发生等生理过程中发挥重要功能外,在肿瘤发生发展等病理过程中亦有着重要作用。本所用cDNA芯片研究肝癌基因表达谱时,发现OPN在伴转移肝癌组织中显著高表达,进一步功能实验提示该蛋白在肝癌侵袭转移中发挥重要功能。尽管如此,对OPN在肝癌转移中的作用机制仍需更深入研究。目前,聚糖结构变化与癌症的关系已引起人们重视,越来越多证据表明,聚糖在表达水平和结构上的变化与肿瘤细胞的侵袭转移有密切关系。OPN是一个高度糖基化蛋白,曾有研究报道其唾液酸化的改变影响其与受体的结合,从而介导转化细胞的侵袭行为。为了更全面了解与肝癌转移相关的OPN糖基化改变,本研究拟在分析OPN表达与肝癌转移相关性的基础上,进一步利用凝集素印迹技术检测OPN的聚糖结构变化,为今后更深入理解OPN在肝癌转移中的作用机制提供基础。第一部分OPN在不同转移潜能肝癌细胞株及肝癌组织中的表达本部分利用Real-Time PCR、Western Blot和免疫组化技术,从mRNA和蛋白水平检测OPN在不同转移潜能人肝癌细胞系Hep3B、MHCC97L MHCC97H、HCCLM3、HCCLM6以及肝癌组织中的表达。细胞水平的分析结果显示,OPN在高转移性肝癌细胞株中的表达明显高于低转移肝癌细胞株(p<0.05)。组织水平的分析结果显示,OPN在伴转移肝癌组织中的表达明显高于不伴转移肝癌组织(p<0.05)。这些结果提示,OPN在肝癌中的异常高表达与转移密切相关。第二部分肝癌转移相关的OPN糖基化改变本部分首先应用免疫沉淀技术纯化肝癌组织中的OPN蛋白,然后采用凝集素印迹方法比较分析OPN在伴转移和不伴转移肝癌组织中的聚糖结构变化。结果显示,与不伴转移肝癌组织相比,伴转移肝癌组织中OPN对朝鲜槐(MAL)、红腰果E型(PHA-E)、欧蔓陀罗(DSA)和伴刀豆球蛋白A (ConA)等凝集素的亲和力明显减弱(p<0.05)。提示,OPN的α2,3-唾液酸、平分型N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)、多天线,偏二天线和高甘露糖型等糖基化修饰的降低可能与肝癌转移相关。结论1.OPN在肝癌中的异常高表达与转移密切相关。2.OPN的α2,3-唾液酸、平分型GlcNAc、多天线,偏二天线和高甘露糖型等聚糖结构的改变可能与肝癌转移相关。潜在应用价值1.OPN可能成为肝癌转移的潜在治疗靶点。2.探索了与肝癌转移相关的OPN糖基化改变,为更全面理解OPN在肝癌转移中的作用机制提供基础,为肝癌防治提供新的靶点。创新点首次探索与肝癌转移相关的OPN糖基化改变。