背景研究显示炎症反应在缺血性卒中、阿尔兹海默病、帕金森病和多发性硬化等神经系统疾病的发病过程中发挥着重要作用,而在中枢神经系统的炎症反应过程中小胶质细胞（Microglia,MG）作为脑内的免疫细胞,在脑损伤后,迅速激活并且主要极化为M1型和M2型两种状态,M1型（促炎型）细胞激活后可产生大量的炎症因子、细胞毒性相关因子等,加速神经损伤;M2型（抗炎型）细胞激活后释放脑源性神经营养因子、血管内皮生长因子和抗炎介质等抑制炎症反应进而促进组织修复的作用。既往研究发现,Notch信号通路影响小胶质细胞的极化,因此,寻找能够作用Notch信号通路且安全有效的药物,将有助于调控小胶质细胞的极化,趋利避害,对多种炎性相关的神经系统疾病预后的改善具有重要意义。脂氧素A4（Lipoxin A4,LXA4）是花生四烯酸的代谢产物,是一种具有抗炎、促进炎症消退作用的内源性脂质介质,可在多种炎症过程中发挥作用。体内研究表明,LXA4可以减少脊髓损伤后的神经炎症和神经性疼痛,可减轻蛛网膜下腔出血后小胶质细胞活化的造成的脑水肿,改善神经功能。此外,LXA4对包括血管性痴呆、阿尔茨海默病（AD）和帕金森病在内的神经退行性疾病具有保护作用。但是,LXA4是否能够作用于Notch信号通路进而调控小胶质细胞的极化尚未见相关研究报道。因此,本研究以脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）诱导的BV2小胶质细胞为研究对象,以脂氧素A4（Lipoxin A4,LXA4）为药物干预手段,观察LXA4的抗炎作用,阐明LXA4对炎症反应中小胶质细胞极化的调控作用,并探讨其可能的机制。旨在为LXA4用于治疗中枢神经系统炎性疾病提供理论依据。目的观察LXA4对LPS诱导的BV2小胶质细胞激活后炎症介质表达的影响,阐明LXA4对炎症反应中小胶质细胞极化的调控作用,并探讨LXA4对小胶质细胞极化影响的可能机制。方法1.实验对象:小鼠小胶质细胞系BV2小胶质细胞购自武汉大学典型培养物保藏中心2.细胞炎症模型构建:用200ng/ml LPS处理BV2小胶质细胞;3.细胞分组:第一部分:（1）Control组:仅用培养液;（2）LXA₄组:在培养液中加入LXA₄;（3）LPS组:在培养液中加入LPS;（4）LPS+LXA₄组:LXA₄预处理后再加入LPS。第二部分:（1）Control组:仅用培养液;（2）LPS组:在培养液中加入LPS;（3）DAPT+LPS组:加入DAPT预处理后,加入LPS培养;（4）LXA4+LPS组:加入LXA4预处理后,加入LPS处理;（5）DAPT+LXA4+LPS组:DAPT预处理后,加入LXA4预处理,后加入LPS处理。4.检测方法4.1.Elisa法检测LPS处理后小胶质细胞培养液上清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-10的含量。4.2.RT-PCR检测LPS处理后的M1型小胶质细胞生物标志物（iNOS、CD32、TNF-α、IL-1β）和M2型小胶质细胞标志物（Arg-1、CD206、IL-10）mRNA表达。4.3.免疫印迹法Western-blot分别检测M1型小胶质细胞标志物（iNOS）和M2型小胶质细胞标志物（Arg-1）蛋白表达情况。4.4.免疫荧光法检测M1型小胶质细胞标志物（iNOS、CD32）和M2型小胶质细胞标志物（Arg-1、CD206）表达情况。4.5.流式细胞术检测CD32、CD206的蛋白表达。4.6.RT-PCR检测Notch信号通路相关分子Notch1、Hes1、Hes5 mRNA表达。4.7.免疫印迹法Western-blot分别检测Notch1、Hes1、Hes5蛋白表达。结果1.LPS作用于BV2小胶质细胞后,RT-PCR及ELISA结果显示炎症因子TNF-α、IL-1β的合成和分泌增多,LXA4对其处理后,TNF-α、IL-1β的合成和分泌量显著降低,而抗炎因子IL-10的合成和分泌量明显增加。2.LPS处理BV2小胶质细胞后,RT-PCR及细胞免疫荧光、流式细胞术检测结果显示:M1型分子标志物iNOS、CD32表达量明显升高,而M2型分子标志物Arg1、CD206的表达未见明显升高,但在LXA4处理后,M2型分子标志物的表达显著升高。3.LPS作用BV2小胶质细胞后,RT-PCR及western blot检测结果显示,Notch通路的效应分子Notch1和Hes1表达显著增加,Hes5表达无显著变化;与LPS组相比,用LXA₄对其进行处理后,Notch1和Hes1的表达显著下降,Hes5的表达显著升高。4.给予Notch信号通路特异性阻断剂γ-分泌酶抑制剂DAPT后,LXA4对炎症因子的抑制作用被阻断;同时LXA4对小胶质细胞极化的调节被阻断。结论LXA4能够抑制LPS后BV2小胶质细胞促炎细胞因子的分泌并且调节小胶质细胞的极化,这种作用可能是通过Notch信号通路实现的。