论文部分内容阅读
目的:通过鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤观察益气解毒方对鼻咽癌宿主调节性T细胞的影响及对相关诱导分化T细胞传导通路的调控效应,从调节性T细胞诱导分化角度探讨益气解毒方干预鼻咽癌肿瘤微环境的相关机制。方法:用人鼻咽癌细胞株CNE2细胞建立裸鼠移植瘤模型,将带瘤裸鼠随机分为模型组、益气解毒方治疗组、顺铂阳性对照组、中西药联合治疗组,分别按照给药方案用药,系统观察各组裸鼠移植瘤生长情况,动态测量移植瘤体积变化;待观察期满后处死动物,取瘤体称重,分别计算抑瘤率,并切取瘤组织标本制片,光镜下观察比较各组移植瘤细胞的病理形态学变化。免疫组化SABC法检测各组标本CD4、CD8、Foxp3表达活性,比较其组间差异。应用RT-PCR法检测各组标本内IL-10、FoxP3和TGF-β的mRNA表达水平,比较其组间差异。采用 Western blotting 技术对 CD4、CD8、Foxp3、IL-10 和 TGF-β蛋白表达水平进行验证。结果:1.中西药联合治疗组、益气解毒方治疗组和顺铂阳性对照组的移植瘤体积均较小,与模型组相比较,差异均具有统计学意义(p<0.01～0.05);3 组的抑瘤率分别为 18.70%、58.40%、43.80%。2.移植瘤组织的光镜观察结果示,模型组瘤细胞核仁大且位于中央;用药处理各组瘤细胞核固缩,密度增加,轮廓变形,出现不同程度的凋亡性变化。中西药联合治疗组细胞可见凋亡小体。3.比较各组移植瘤组织相关指标免疫组化检测结果,益气解毒方明显抑制了裸鼠移植瘤瘤细胞的CD4、FoxP3表达,同时明显提高了 CD8的表达。其中,中西药联合治疗组较益气解毒方治疗组、阳性对照组效果更为明显。4.半定量RT-PCR结果显示,西药阳性对照组,益气解毒方治疗组,中西药联合治疗组及模型组瘤组织TGF-β mRNA表达量依次为0.469±0.047、0.351 ±0.063、0.301±0.057、0.833±0.045,Foxp3mRNA的表达量依次为 0.512±0.036、0.339±0.058、0.306±0.062、0.569±0.037,IL-10 mRNA 的表达量依次为 0.803±0.080、0.412±0.026、0.409±0.029、0.896±0.052,四组间比较结果差异有统计学意义(P<0.05),提示益气解毒方明显抑制了 TGF-β、FoxP3和IL-10在裸鼠移植瘤组织中的表达。结论:益气解毒方抑制鼻咽癌细胞裸鼠移植瘤的生长机制,可能是通过通过抑制IL-10、TGF-β使T调节性细胞生成受到影响,从而使CD4+T细胞向CD8+ T细胞转化,改善微环境中免疫抑制状态来实现。