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γδT细胞是一种主要组织相容性复合体（Maior histocompatibility complex，MHC）非限制性杀瘤细胞，在肿瘤继承性细胞免疫治疗中有应用前景。 热休克蛋白（Heat shock proteins，HSP）是一种进化上高度保守的蛋白质，是γδT细胞的超抗原，不仅能提高细胞对有害刺激的抵抗能力，而且在免疫应答的诱导调节过程中也发挥重要作用。 从肿瘤组织中提取的HSP-肽复合物具有免疫原性，可以产生针对该肿瘤的特异性免疫，诱导杀伤性T淋巴细胞（Cytotoxic T lymphocytes,CTL）免疫应答，特异杀伤肿瘤细胞。临床实验表明，将从肿瘤患者手术切除的肿瘤组织中提取的HSP-肽复合物回输给患者本人，其残余肿瘤的大小及肿瘤复发时间均得到控制，且存活时间得到延长。但患者体内肿瘤组织中HSP-肿瘤肽复合物的量比较少，难以达到有效量。 本实验用异种HSP70及异种HSP70-肿瘤抗原复合物体外扩增人外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs），以期寻找一种新的有效的扩增γδT细胞的方法，并检测了所扩增的γδT细胞的亚型及细胞毒活性；用ADP化学连接法体外构建了HSP70BCG-Daudi肿瘤肽复合物并检测其活化的γδT细胞的增殖、细胞毒活性及分泌的细胞因子的水平，主要结果如下： 一：异种HSP70对γδT细胞的活化扩增作用： 以抗TCRγδ抗体为阳性对照，分别用HSP70BCG及从榄香烯处理的小鼠Hca-F肝癌细胞复合瘤苗中提取的HSP70-肽复合物来刺激人PBMCs的γδT细胞，以期建立一种新的扩增体系，并探索异种HSP70对人γδT细胞的活化作用。 1、细胞的扩增及γδT细胞受体表达： 细胞培养14天后，固相抗体法可使培养的细胞总数增加30-40倍，γδT细胞的平均纯度为86.7％±5.7％；HSP70BCG可使培养的细胞总数增加7-8倍，γδT细胞的平均纯度为71.23％±2.7％；HSP70-肽复合物可使培养的细胞总数增加5-6倍，γδT细胞的平均纯度为27.26％±4.24％；1640对照组培养体系，7天左右细胞开始出现死亡，14天时以死细胞居多，活细胞总数未见增长，γδT细胞的平均纯度为7％±2％。倾T细胞平均纯度各组间均存在显著性差异（p<0.05），即扩增效率依次为:抗体组>H SP70BcG>HsP70一肤复合物习640。流式细胞仪及RT一PCR结果表明:抗体及Hsp、c。活化的下6T细胞以表达VYg/V62亚型为主，且Vsl、V62、V63三种亚型均得到表达。 2、异种HsP70扩增的协T细胞对Daudi的杀伤作用: 细胞毒实验结果表明:在效靶比为ro:1时，各培养体系所扩增的倾T细胞对Daudi的杀伤活性依次为:抗体组98.8%士0.02叹户HSP二G71 .1%士2.04%>HSP、肚复合物52.名3%士n.67%>对照组45.57%士9.94%，各组间存在显著性差异（P<0.05）。在效靶比为5:1时，杀伤活性依次为:抗体组85，2%土5.79%>HSP7oBc。组50.27%士7.33%>HSP7。一肤复合物组39.49%士2.49%及对照组34.98%士6.3%，后两组之间无显著性差异（P>0 .05）;在效靶比为2.5:1及1:1时，仅抗体组强于其他组（P<0.05）。 二、HsP7。aodi肿瘤肤对Y盯细胞的活化作用: 将抗体活化断6T细胞静息化处理后，分别用DaUdi混合肚、HSP及ADp法连接的HSP一aUdi肿瘤肤复合物刺激24、48小时后，测细胞增殖及其对Daudi的杀伤活性，并于刺激的24小时取上清，测TNF一a生物学活性，结果如下: 1、杀伤实验:在效靶比为10二1时，杀伤活性依次为:HSP70BcG一Daudi肿瘤肤复合物88.360;0士8.210/0> HSp071.44%士13.7%、Daudi混合肤69.61%士11.530，0>对照组50.47%士8.76%（P<0 DS）。在效靶比为5:1时，刹务活性依次为:HSP一audi肿瘤肤复剖勿75.23%士16.360/de HSp58.13%士21.780/0、DaUdi混合肤53.16%士15.960;0、对照组39.43%士7.74%（后三者间无差别，P>0.05）。 2、增殖实验:24小时及48小时的增殖结果各组间无差别。而未静息化处理的Y6T细胞的24小时及48小时的增殖均大于上述各组（P<0.05）。 3、细胞因子:未检测出上述各刺激组的上清中TNF一a生物学活性有何差别。 实验结果表明异种HSP7。对人外周血单个核细胞中的必T细胞具有活化作用，与儿一2合用可以扩增协T细胞。HSP70Bc。对协T细胞的活化扩增作用强于小鼠的HSP70一Hca一F肿瘤肤复合物，其活化扩增的泌T细胞不仅百分率高，而且V剐、V62、V63三种受体亚型都得到表达，受体库完整，扩增的协T细胞对Dandi淋巴瘤细胞有较强的杀伤作用。用ADP构建的HSP70Bc。一Daudi肿瘤肤复合物能提高静息化处理的邓T细胞对Daudi的杀伤活性，为协T细胞及HSP70Bc。一肿瘤抗原疫苗的应用提供了实验依据。