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目的:探讨佛手宁神方的改善睡眠作用及其作用机制,为佛手宁神方在功能性食品、药品等相关领域的应用提供实验依据。方法:1.雄性昆明小鼠随机分成5组,分别为空白组,艾司唑仑组(0.4 mg·kg-1·d-1),佛手宁神方低、中、高剂量组(12,24,48g·kg-1·d-1),连续给药1周。末次给药后腹腔注射阈上或阈下剂量戊巴比妥钠,记录各组小鼠睡眠潜伏期、睡眠持续时间及入睡只数。2.雄性SD大鼠随机分成6组,分别为空白组,模型组,艾司唑仑组(0.2 mg·kg-1·d-1),佛手宁神方低、中、高剂量组(6,12,24 g·kg-1·d-1),每组8只;采用腹腔注射PCPA350mg·kg-1·d-1制作失眠大鼠模型;造模完成后第1天开始灌胃给药,连续1周。观察大鼠精神状态及体重变化;旷场实验检测各组大鼠站立次数、粪便粒数和运动总路程;酶联免疫吸附法测定大鼠脑内5-HT、DA和NE的含量;实时荧光定量PCR检测各组大鼠海马5-HT1AR mRNA的表达水平;Western blot和免疫组化法检测各组大鼠海马5-HT1AR蛋白的表达水平。结果:1.与空白组相比,佛手宁神方高剂量组和艾司唑仑组能提高阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡率(P<0.05,P<0.01),缩短阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠潜伏期(P<0.01),延长阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠持续时间(P<0.01)。2.模型组体重增长较空白组缓慢(P<0.01);佛手宁神方中、高剂量组体重增长较模型组快(P<0.05)。旷场实验结果显示,模型组大鼠运动总路程较空白组增加(P<0.05),站立次数和粪便粒数增加不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。艾司唑仑组和佛手宁神方中、高剂量组大鼠运动总路程较模型组减少(P<0.05,P<0.01)。佛手宁神方高剂量组大鼠站立次数和粪便粒数减少不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。3.与空白组相比,模型组海马5-HT含量下降(P<0.01),下丘脑NE和DA含量上升(P<0.01);艾司唑仑组和佛手宁神方高剂量组海马5-HT含量较模型组增加(P<0.05);佛手宁神方高剂量组下丘脑NE和DA含量较模型组减少(P<0.05)。4.免疫组化结果显示与空白组相比,模型组5-HT1AR蛋白在海马CA1区表达颜色浅(P<0.01);艾司唑仑组和佛手宁神方中、高剂量组5-HT1AR蛋白表达颜色较模型组深(P<0.01)。Wetern blot结果显示,模型组海马5-HT1AR蛋白表达较空白组降低(P<0.01),艾司唑仑组和佛手宁神方中、高剂量组海马5-HT1AR蛋白表达较模型组上升(P<0.05)。5.实时荧光定量PCR结果显示,模型组海马5-HT1A R mRNA表达较空白组降低(P<0.01);艾司唑仑组和佛手宁神方中、高剂量组海马5-HT1ARmRNA表达较模型组上升(P<0.05)。结论:佛手宁神方具有改善睡眠的作用,其机制可能与调节脑内5-HT、NE和DA含量的平衡,上调5-HT1AR蛋白和mRNA的表达水平有关。