论文部分内容阅读
目的：对树鼩Toll样受体1(Toll like receptor1，TLR1)基因进行克隆和测序，对其序列进行分析以了解其蛋白结构及相关功能。为今后应用树鼩作为病毒感染动物模型开展病毒识别机制和防治策略研究提供理论基础。 方法：在GenBank中查找人类、黑猩猩、猕猴、小鼠、褐家鼠、成都麻羊、野马、野猪、中国荷斯坦牛、家犬共十种物种的TLR1的mRNA基因序列，在其高度保守区设计树鼩TLR1基因的简并引物；运用RT-PCR方法从树鼩外周血总RNA中体外扩增树鼩TLR1的cDNA基因序列；将扩增的目的基因片段纯化回收与T载体连接；转化感受态细菌，筛选阳性克隆子并用菌落PCR验证；转化成功后进行测序，将测序结果用NCBI的BLAST工具进行检索比对序列，确认其为树鼩TLR1基因序列；并用生物信息学软件对序列结构进行分析预测。 结果：1.在体外成功扩增出树鼩TLR1的cDNA片段，回收获得其目的基因片段；2.成功筛选出阳性克隆子并进行DNA测序，获得树鼩TLR1的cDNA部分基因序列，序列长度为1110bp。 结论：运用生物信息学软件对树鼩TLR1基因序列进行分析，预测该基因序列编码370个氨基酸，包括了TLR1序列跨膜区、C端富含亮氨酸重复基序(LRR)结构域和部分胞外区，分子量为42.33kDa，等电点为8.24。含有11个丝氨酸(Ser)、3个苏氨酸(Thr)和6个酪氨酸(Tyr)位点可能成为蛋白质的磷酸化位点。氨基酸序列比对分析表明，树鼩TLR1基因序列与人类的TLR1基因序列具有很高的同源性，树鼩作为实验动物模型其实验结果更具参考价值。