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目的：探讨重组人红细胞生成素（recombinant human erythropoietin,rhEPO）对高糖环境下体外培养正常人肾小管上皮细胞（human kidney proximal tubular epithelialcell-2,HK-2细胞）RhoA/ROCK信号通路的影响，为糖尿病肾病（diabeticnephropathy，DN）患者药物治疗寻找新的途径。方法：将体外培养的HK-2细胞按随机数字表法分为空白对照组、高糖诱导组(D-葡萄糖终浓度30mmol/l)、渗透压对照组（甘露醇终浓度24.5mmol/l）、rhEPO对照组(rhEPO终浓度为20U/ml)、不同浓度rhEPO组(rhEPO终浓度分别为5、10、20U/ml)及Rho激酶抑制剂（Y27632）组(Y27632终浓度为10μmol/l，加入Y2763230min后加D-葡萄糖，D-葡萄糖终浓度为30mmol/l)，各实验组均给予诱导时间为24h。光学显微镜下观察各实验组HK-2细胞形态学的变化。RT-PCR法检测各实验组HK-2细胞中RhoAmRNA、ROCK1mRNA的表达水平;细胞免疫荧光法检测各实验组HK-2细胞E-钙黏蛋白(epithelial-cadherin，E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)的表达情况;ELISA法检测各实验组HK-2细胞培养上清液中纤维连接蛋白(fibronectin，FN)、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）等蛋白的表达。流式细胞术检测各实验组HK-2细胞凋亡的变化。结果:光学显微镜下观察HK-2细胞形态的变化，正常HK-2为椭圆形或梭形，呈“鹅卵石”或“铺路石”样排列，给予高糖刺激后细胞胞体逐渐变长，细胞间隙逐渐变大，但给予不同浓度rhEPO或Y27632后，其形态学明显改善。RT-PCR结果显示高糖诱导组RhoAmRNA及ROCK1mRNA表达较空白对照组显著升高（P<0.05），但分别给予不同浓度rhEPO干预后，RhoAmRNA及ROCK1mRNA的表达显著减少（P<0.05）。给予Y27632抑制后，RhoAmRNA的表达较高糖诱导组无显著性差异（P>0.05），而ROCK1mRNA的表达则明显减少（P<0.05）。ELISA及细胞免疫荧光结果显示高糖诱导组FN蛋白、α-SMA蛋白的表达较空白对照组明显增加（P<0.05），但分别加入不同浓度rhEPO干预或Y27632抑制后，FN蛋白、α-SMA蛋白的表达明显减少（P<0.05）。高糖组E-cadherin蛋白表达较空白对照组明显减少，分别给予不同浓度rhEPO干预或Y27632抑制后，E-cadherin蛋白表达明显增加（P<0.05），在实验用rhEPO浓度范围内，蛋白的表达呈现出与rhEPO浓度的相关性。ELISA结果显示高糖诱导组IL-6蛋白、TNF-α蛋白表达较空白对照组明显增多（P<0.05），但分别给予不同浓度rhEPO干预或Y27632抑制后，IL-6蛋白、TNF-α蛋白表达明显减少（P<0.05），并且在实验用rhEPO浓度范围内，呈现出rhEPO浓度的依赖性。流式细胞检测结果显示高糖可诱导HK-2凋亡，但给予不同浓度rhEPO干预或Y27632抑制后，HK-2细胞早期凋亡率及晚期凋亡加死亡细胞比率明显下降（P<0.05）。Person直线相关分析提示高糖诱导组及不同浓度rhEPO组RhoAmRNA与ROCK1mRNA的表达呈正相关。结论：1、高糖能通过增加体外培养的HK-2细胞中RhoAmRNA、ROCK1mRNA的表达水平，使细胞E-cadherin蛋白表达减少，α-SMA蛋白表达增多，诱导正常HK-2细胞发生间充质转分化（epithelial to mesenchymal transition,EMT），引起细胞外基质成分FN蛋白表达增加，在实验用rhEPO浓度范围内，rhEPO可呈浓度依赖性抑制高糖诱导的HK-2细胞转分化过程，延缓肾间质纤维化（renalinterstitial fibrosis，RIF）的进展。2、在实验用rhEPO浓度范围内，rhEPO可呈浓度依赖性地抑制HK-2细胞凋亡从而发挥其肾脏保护作用。3、rhEPO可以通过减少炎症因子的产生，减轻炎性反应，从而延缓DN的进展。4、rhEPO对高糖环境下体外培养的HK-2细胞的保护作用可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。