乙型肝炎病毒经生殖细胞垂直传播的实验研究

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目的:检测乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阳性卵巢肿瘤患者卵巢组织中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA,探讨HBV可以感染人类卵巢组织细胞,为HBV感染经生殖细胞垂直传递提供实验依据;构建携带乙型肝炎病毒表面抗原基因(HBV S)的真核表达载体,转染肝癌细胞HepG2,检测构建载体及HBV S基因在肝癌细胞中的表达。方法:应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)和逆转录聚合酶链反应(reversetranscription PCR,RT-PCR)等分子遗传学技术检测卵巢肿瘤患者卵巢组织细胞中HBV DNA、构建重组载体、转染肝癌细胞和检测目的基因表达。结果:①PCR、FISH检测结果发现,HBsAg阳性卵巢肿瘤患者卵巢组织细胞存在HBV DNA,与对照组HBsAg阴性卵巢肿瘤患者卵巢石蜡组织细胞中的检测结果比较,实验结果差异高度显著,P<0.01;②以质粒pBR322-HBV为模板,PCR扩增出3.2kb全长HBV DNA及700 bp的HBV S基因;③成功构建载体pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-HBS:④R7-PCR检测载体转染HepG2细胞表达HBV SmRNA。结论:①HBV可以感染卵巢组织细胞,HBV感染有可能通过卵细胞进行垂直传播;②pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-HBS真核表达载体构建成功。
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