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本文主要从以下几个部分展开论述：
第一部分 目的:研究热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂BIIB021对人急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4细胞增殖的抑制作用,为急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)的临床治疗提供指导。
方法:采用MTT法、流式细胞术检测药物处理前后,Molt-4细胞增殖和凋亡的变化:利用Hoechst33258荧光染色法观察药物作用前后细胞形态学的改变;运用流式细胞术检测药物作用后Molt-4细胞周期阻滞情况:Western blot法检测BIIB021对Molt-4细胞周期和凋亡相关蛋白的调控以及Akt、p65蛋白表达的变化。
结果:MTT法检测结果显示BIIB021能抑制Molt-4细胞的增殖,并且随着药物剂量增大、作用时间延长,细胞增殖抑制率逐渐上升,具有浓度、时间依赖性,48h、72h的药物半数抑制浓度(IC50)分别为384.6nM、301.8nM,流式细胞术可检测到细胞凋亡;Hoechst33258荧光染色可观察到典型的凋亡小体;流式细胞术检测BIIB021能阻滞细胞于G0/G1期;Western blot结果显示BIIB021激活caspase-8、-9、-3和PARP,下调CDK4/6,上调p21和p18,并能明显抑制Akt和p65。
结论:BIIB021能激活死亡受体途径和线粒体途径诱导Molt-4细胞凋亡,并通过影响CDK4/6、p21、p18使得Molt-4细胞被阻滞于G0/G1期,抑制细胞增殖,BIIB021对Molt-4的Akt和NF-κ B也有抑制作用。
第二部分 目的:研究热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂BIIB021联合雷公藤内酯醇(TPL)对Molt-4的杀伤作用,并进一步探讨其作用机制,为急性T淋巴细胞白血病临床治疗提供新的思路。
方法:采用MTT法、流式细胞术检测BIIB021、TPL单药及联合对Molt-4细胞增殖抑制作用和凋亡情况;Hoechst33258荧光染色法观察药物处理后细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测BIIB021对细胞凋亡相关蛋白的调控以及p53、MDM2蛋白的变化。
结果:BIIB021与TPL联合具有协同抑制Molt-4细胞增殖的作用,流式细胞术结果显示联合处理能引起更多的细胞凋亡;Hoechst33258荧光染色观察到联合组比单药组细胞凋亡更明显;联合用药并没有增强细胞G0/G1期阻滞;Western blot结果显示,BIIB021与TPL联合后caspase-8、-9、-3和PARP的激活更明显,Bcl-2家族部分成员也发生变化,TPL显著上调p53的表达,BIIB021能抑制MDM2的表达。
结论:BIIB021联合TPL能协同抑制Molt-4细胞增殖,其作用机制可能与p53信号通路激活有关。