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目的:通过建立五步蛇毒大鼠中毒模型,观察五步蛇毒对大鼠SVZ处Nestin基因及蛋白表达的影响,并探讨HBO联合抗毒血清干预对其的作用。方法:将96只健康成年雄性SD大鼠,随机分为4组:对照组、蛇毒组、血清组、HBO+血清组,每组24只。经尾静脉注射五步蛇毒建立中毒模型,血清组于造模成功后立即尾静脉注射抗毒血清,HBO+血清组于注射抗毒血清后0 h、4 h、11 h、23 h予以HBO治疗一次,每个时间点各6只,对照组不予任何处理。上述各组中的一部分大鼠分别于HBO治疗结束后的相应时间点(即注射抗毒血清后1 h、5 h、12 h、24h)用生理盐水及多聚甲醛经左心室灌注固定脑组织,另一部分大鼠断头后立即冰上分离SVZ处组织,速冻备用,HE染色观察脑组织病理变化,采用IHC、RT-PCR、Western-blot等检测各组SVZ处Nestin m RNA及蛋白的表达变化。结果:1.脑组织病理变化:与对照组比较,蛇毒组SVZ处出现明显组织水肿,细胞数目减少,排列紊乱;经抗毒血清和HBO干预后SVZ处组织水肿明显减轻,细胞数增多,排列较规则;HBO联合干预组病理变化改善更突出,且以注毒后5 h内最明显。2.SVZ处Nestin基因及蛋白表达变化:Nestin蛋白在颅内表达于NSCs胞浆。IHC结果提示对照组未见Nestin阳性细胞,蛇毒组仅有少许Nestin阳性表达细胞,抗毒血清和HBO干预后Nestin阳性细胞明显增多,着色加深(P<0.05)。相对定量结果显示:与对照组比较,蛇毒组各时间点SVZ处Nestin m RNA和蛋白的表达量均明显升高(P<0.05);与蛇毒组相比,血清组、HBO+血清组Nestin m RNA和蛋白的表达量又进一步升高,注毒后1 h、5 h时差异显著(P<0.05),而在HBO+血清组其表达水平又显著高于血清组(P<0.05)。结论:1.五步蛇毒可对脑组织造成神经毒性损伤;2.HBO联合抗毒血清干预可对五步蛇毒中毒后脑损伤发挥保护作用,可能与SVZ处Nestin蛋白的上调有关;3.HBO联合抗毒血清早期干预的脑保护效果优于单独使用抗毒血清,尤其在五步蛇毒中毒后5 h内作用最显著。