LRRC4(leucine-rich repeats containing 4)是我室克隆的一个富亮氨酸重复(leucine-rich repeats，LRR)超家族新成员，定位于染色体7q31-32。前期研究工作表明LRRC4在正常人脑组织中相对特异高表达，而在80％原发性脑瘤中表达明显下调或缺失，尤其是脑胶质瘤，提示该基因对于中枢神经系统正常功能的维持起重要作用，是一个新的候选抑瘤基因。 为进一步研究LRRC4在胚胎各器官组织中的表达谱及在不同分化阶段脑胶质瘤中的表达差异，本研究制备了抗LRRC4编码蛋白的多克隆抗体，以期为后续的研究工作提供有利的工具。首先运用DSGenel.1软件分析LRRC4编码蛋白的亲水性、抗原性及跨膜结构域，避开跨膜结构域，选取亲水性及抗原性均好的蛋白序列用以构建融合表达载体，在E．coli JMl09中IPTG诱导GST融合蛋白表达。实验中发现该融合蛋白主要以包涵体形式存在，应用洗涤纯化的包涵体蛋白免疫新西兰兔后收集抗血清，ELISA检测其效价为1:10<8>以上。抗血清经纯化后去除了抗GST蛋白及菌体蛋白的成分，效价高、特异性好，能以1:2000稀释用于Western blot及免疫组化实验。应用自制的抗体通过Western blot及免疫组化构建了LRRC4在胚胎各器官组织中的表达谱，进一步证实了LRRC4为脑组织相对特异性表达基因。随后通过免疫组化检测LRRC4在37例脑胶质瘤中的表达水平，结果显示LRRC4在12例星形胶质细胞瘤Ⅰ级中表达下调，在14例星形胶质细胞瘤Ⅱ级中表达下调或缺失(10/14表达下调，4/14表达缺失)，在11例星形胶质细胞瘤Ⅲ级中表达缺失。从正常脑组织及星形胶质细胞瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的免疫组化结果中分别计数10000个细胞，同时计数相应的阳性细胞数，运用SPSS 11.0软件进行统计分析。结果显示：LRRC4的表达在正常脑组织与各级脑胶质瘤中有显著差异(P<0.001)；在星形胶质细胞瘤I级与胶质瘤其它各级中亦有显著差异(P<0.01)；而在星形胶质细胞瘤Ⅱ、Ⅲ级之间没有差异(P>0.05)。由此表明LRRC4的表达水平与胶质细胞的分化程度及脑胶质瘤的病理分级密切相关。 LRRC4作为一个新的脑瘤候选抑瘤基因，在不同类型的脑瘤中其作用模式可能并不相同。在星形胶质细胞瘤中，它与瘤体的分化程度密切相关，随着胶质细胞瘤恶性程度的增高而表达下调甚至缺失，因而可能是一个胶质细胞分化决定基因。因此，进一步研究LRRC4在脑胶质瘤中表达下调或缺失的机制及在脑胶质瘤发生发展过程中的具体作用对今后脑胶质瘤的临床病理诊断与治疗具有重要意义。