羊瘙痒因子263K的灭活研究与新型原核表达载体的构建

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为了研究羊瘙痒因子263K的灭活方法,防止朊病毒的实验室污染和医院内传播,该实验采用不同浓度的NaOH、NaOCl、SDS、温度变化以及加热高压分别与3%SDS、1 mol/L NaOH联合处理羊瘙痒因子263K,经蛋白酶K(Proteinase K,PK)消化后通过Western blot检测观测prpsc的PK抗性;透析后颅内接种仓鼠,通过发病潜伏期观察prpsc的感染性.为了利用基因重组技术构建一种新型原核表达载体,使之表达带有His和GST标签的融合蛋白,该实验以质粒pGEX为模板,将用PCR扩增出的GST基因插入到载体pQE-30中构建pQE-30-GST,经IPTG诱导GST蛋白表达并用Western bolt鉴定.新型原核表达载体pQE-30-GST可进行多种蛋白质的表达,表达的蛋白质可经两种方法纯化以提高蛋白质的纯度,融合蛋白可经羟胺裂解获得目的蛋白质.此项研究为进一步研究朊病毒的结构与功能建立了实验基础.
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