【摘 要】
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该研究分别克隆胡萝卜伸展蛋白信号肽编码序列、pyk10启动子片段、无花果曲霉phyA基因cDNA,并将其连接成一个表达单元,构建植酸酶根特异性表达载体;以农杆菌介导法,利用大豆
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该研究分别克隆胡萝卜伸展蛋白信号肽编码序列、pyk10启动子片段、无花果曲霉phyA基因cDNA,并将其连接成一个表达单元,构建植酸酶根特异性表达载体;以农杆菌介导法,利用大豆子叶节再生系统转化大豆,以期获得根分泌植酸酶的转基因大豆,提高大豆对土壤中有机磷的利用能力.用RT-PCR方法从无花果曲霉(Aspergillus ficuum3.4322)中扩增出一条约1.4kb的特异性条带,将其克隆到pMD18-T载体中.应用PCR方法分别从胡萝卜基因组DNA中扩增出96bp的伸展蛋白信号肽编码序列片段,从拟南芥基因组DNA中扩增出1454bp的pyk10启动子片段,然后分别克隆到pMD18-T载体中.序列分析表明,伸展蛋白信号肽编码序列与已发表序列完全相同;pyk10启动子片段与已发表序列同源性达到98﹪.以栽培大豆[Glycine max(L.)]吉林35、中黄28、南农、铁丰29、铁丰30、开育12的子叶节为外植体,用LBA4404农杆菌(含pPC-KSA质粒)进行转化,研究了影响大豆子叶节转化的因素.对T<,1>代转化植株进行Southern杂交检测,证明2株为阳性,对其进一步进行根系分泌植酸酶活性测定.结果表明,转基因植株根系分泌的植酸酶活性比对照植株提高4.94~9.65倍,初步表明我们构建的KSA表达单元,在大豆根部中能够有效表达,并分泌出有活性的植酸酶.
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