论文部分内容阅读
目的:Th17细胞及其代表性细胞因子IL-17在牙周炎的发生发展中起着重要的作用。本研究旨在探索Th17型细胞因子在牙周炎骨破坏过程中的作用机制,研究IL-17对人牙周膜成纤维细胞参与破骨细胞活化的影响,探讨牙周炎骨吸收的可能致病机制。方法:用不同浓度的IL-17(0、1、10、25、50、100ng/ml)处理原代培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs),采用实时定量逆转录PCR、酶联免疫吸附实验(ELISA)、Western blot等方法检测核因子κB受体活化子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的mRNA和蛋白的表达水平;此外,还选择了特异性信号通路抑制剂:10 uMNF-κB抑制剂(PDTC)、10uMp38MAPK 抑制剂(SB203580)、10uMPI3K/Akt抑制剂(LY294002)预处理HPDLFs 1h,然后再加入25 ng/ml的IL-17培养24h,比较不同抑制剂预处理后RANKL表达的改变,探索IL-17诱导人牙周膜成纤维细胞RANKL表达的可能信号传导通路。结果:不同浓度的 IL-17(0、1、10、25、50、100 ng/ml)处理 HPDLFs 后,上调了 HPDLFs中RANKL和OPG mRNA的表达,但对RANKL的上调作用更显著,其中IL-17浓度为25 ng/ml时RANKL和OPG mRNA的表达最强(分别为P<0.001,P<0.01),相应的RANKL/OPG比值增加(P<0.001)。蛋白水平上,sRNAKL在细胞上清中的浓度低于试剂盒的最低检出限,RANKL的Western blot结果与其mRNA水平趋势基本一致;而OPG在细胞上清中的分泌量经IL-17处理后均显著下降(P<0.001)。同时发现用不同信号通路抑制剂预处理HPDLFs后,RANKL的表达均下降,其中SB203580抑制效果最显著(P<0.01)。结论:Th17型细胞因子IL-17可通过诱导人牙周膜成纤维细胞表达RANKL,破坏RANKL/OPG平衡,影响破骨细胞分化的细胞因子微环境,在破骨细胞分化和牙周炎骨吸收中起着一定的调节作用;信号通路的初步研究结果提示MAPK通路可能为IL-17参与调控牙周炎骨破坏的关键通路,研究结果将有助于我们更全面深入理解牙周炎的免疫致病机制,并为牙周炎的免疫干预治疗筛选潜在靶点提供依据。