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目的:探讨血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)对人肝癌细胞(HepG2)迁移能力的影响并探讨相关的分子机制。
方法:Transwell法检测HO-1表达不同的稳定转染肝癌细胞系HepG2-mock,HepG2-HO-1,HepG2-mHO-1(以下分别用mock,H1A,H1B,mH1代替)的迁移能力的差异;Western Blot检测细胞中HO-1和信号转导分子P-P38MAPK的蛋白表达差异;半定量RT-PCR法及ELISA法检测细胞中IL-6转录水平和蛋白水平的表达差异;瞬时转染HO-lshRNA和IL-6siRNA沉默相应细胞中的HO-1和IL-6;CORM-2被用作HO-1活性产物CO的代替物处理mHl细胞,并观察HO-1是否是通过CO这个活性产物发挥作用。
结果:
1、与转染空质粒对照组相比,HO-1表达最高的H1B细胞迁移能力明显降低(p<0.01),IL-6mRNA水平与蛋白分泌水平也明显下调(p<0.05),相应的信号转导分子P-P38MAPK表达明显减少;HO-1活性最低的mH1细胞迁移能力最强(p<0.05),IL-6表达最高,信号转导分子P-P38MAPK的蛋白表达也最多;
2、H1B细胞中的HO-1沉默后,该细胞的迁移能力明显增强(19<0.05),IL-6的表达也显著提高(p<0.05),信号转导分子P-P38MAPK表达增强;在HO-1活性最低的mH1细胞中,用IL-6siRNA沉默该细胞中的IL-6后,该细胞的迁移能力明显减弱(p<0.01);
3、用HO-1的活性产物CO的类似物CORM-2处理mH1细胞,该细胞的迁移能力降低,炎症因子IL一6表达减少,P-P38MAPK表达也明显减少。
结论:本研究证实了HO-1对肝癌细胞移动能力的影响并阐明其部分分子机制,为肝癌迁移的研究提供理论依据,为肝癌的临床诊断和治疗提供新的思路。