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目的:通过RNA干扰技术对大肠癌细胞人端粒酶逆转录酶hTERT基因的特异性抑制作用,为RNA干扰技术对大肠癌的基因治疗提供理论依据。方法:1.大肠癌细胞株HT-29的培养传代。2.化学合成靶向于hTERT基因的siRNA,用脂质体转染法将其导入大肠癌细胞内。3.实验分组如下:Control组(未转染的HT-29细胞),Lipofectamine组(脂质体组),加入阴性对照N-hTERT siRNA组(简称阴性组),加入干扰hTERT的sihTERT组(RNA干扰组)。4.通过TRAP,RT-PCR和Western Blot方法分别检测大肠癌细胞转染前后细胞的端粒酶活性,hTERTmRNA和蛋白水平,流式细胞仪检测细胞生长增殖和凋亡情况。结果:1.荧光显微镜照片fluorescence显示大肠癌HT-29细胞的转染效率为60%。2. Control组、N-hTERT组、Lipofectamine组和sihTERT组的端粒酶活性分别为1.14±0.21,1.10±0.19,1.17±0.22,0.73±0.14,sihTERT组的端粒酶活性明显下降,与其他三组相比差异有非常显著性(p<0.01)。3. hTERT mRNA在Control组、N-hTERT组、Lipofectamine组和sihTERT组中的表达分别为0.87±0.15, 0.91±0.16, 0.85±0.14, 0.47±0.08,sihTERT组与其他三组相比,hTERT mRNA表达水平显著下降,差异有非常显著性(p<0.01)。4. hTERT蛋白在Control组、N-hTERT组、Lipofectamine组和sihTERT组中的表达分别为0.62±0.12, 0.67±0.13,0.59±0.12, 0.37±0.07,sihTERT组与其他三组相比,hTERT蛋白表达显著下降,差异有非常显著性(p<0.01)。5. Control组、N-hTERT组、Lipofectamine组和sihTERT组的细胞凋亡率分别为(7.5±0.21)%、(8.6±0.24)%、(8.3±0.15)%和(49.5±0.26)%,sihTERT组细胞凋亡率明显升高,与其他三组相比差异有非常显著性(p<0.01)。结论:RNA干扰技术能特异性沉默大肠癌细胞hTERT基因,下调hTERT基因mRNA及蛋白表达水平,降低端粒酶活性,抑制癌细胞生长增殖从而促进大肠癌细胞凋亡,为大肠癌的基因治疗研究提供理论依据。