中药水煎液对高铝诱导斑马鱼骨质疏松的影响

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铝在骨骼过量蓄积会导致骨质疏松症。中药治疗骨质疏松症有很好的疗效,毒副作用小,但作用机理还未得到全方面的解释,仍需不断补充与完善。基于骨质疏松症与体内铝过载有关,而目前未见驱铝样作用机理的药物,从铝过载的角度考虑,我们推测中药治疗骨质疏松的机制可能是中药中所含的成分与Al3+形成络合物,从而使得机体内铝的含量减少,进而达到治疗效果。本课题组前期建立了一种体外评估中药络合铝能力的方法,筛选出对铝络合能力强的中药。斑马鱼具有与人类基因骨骼发育相似度高、能够保持在体动物的完整性等优势,近年来广泛应用于骨骼疾病的研究。本文采用斑马鱼为模型动物,氯化铝为造模用药,建立一种快速、高效的高铝诱导斑马鱼骨质疏松的模型,研究体外筛选出对铝络合能力强的益智仁、人参、党参、郁金、白豆蔻、鱼腥草等6味中药防止斑马鱼骨丢失的作用,以进一步验证前期实验结果,为这些中药用于预防和治疗铝致骨质疏松症提供研究基础;为进一步阐明中药治疗骨质疏松症的作用机理及物质基础提供实验方法与依据。实验以受精后第3天(3 dpf)斑马鱼幼鱼为模型,用不同浓度的氯化铝(5、10、15、20μg/m L)溶液培养斑马鱼,于7 dpf进行茜素红和阿尔新蓝染色并统计骨矿化面积、累积光密度值及软骨形成面积;在5μg/m L氯化铝溶液培养至7 dpf的基础上,移除氯化铝,改用阳性对照药去铁胺和不同浓度的人参、益智仁、郁金、党参、鱼腥草、白豆蔻水煎液(0.1、1、10、50、100μg/m L)培养至11 dpf,茜素红和阿尔新蓝染色,统计骨矿化面积、累积光密度值及软骨形成面积。用不同浓度氯化铝溶液培养斑马鱼后,斑马鱼骨矿化面积、累积光密度值和软骨形成面积呈剂量依赖性降低,且与空白对照组相比,差异具有统计学意义(p<0.001)。50μM去铁胺可防止高铝诱导斑马鱼骨量丢失,修复其软骨损伤。益智仁(0.05、0.1、0.5μg/m L)、人参(0.1μg/m L)、郁金(0.1、1、10、50、100μg/m L)、党参(0.1、1、10μg/m L)、白豆蔻(10、50、100μg/m L)能防止高铝诱导斑马鱼骨丢失;鱼腥草(1、10μg/m L)可增加高铝诱导斑马鱼的骨矿化量。本文所建立的高铝诱导斑马鱼骨质疏松模型有明显的骨丢失及软骨损伤,可用于防治骨质疏松药物及其微量成分的筛选;去铁胺对所建立的模型有防止骨丢失的作用,证明了该模型的可行性,同时可选择其作为本模型的阳性对照药。益智仁、人参、党参、郁金、鱼腥草、白豆蔻均具有防止高铝诱导斑马鱼骨丢失的作用,进一步证明了前期体外筛选的实验结果;且与铝络合可能是郁金、鱼腥草、人参抗骨质疏松的机理之一;益智仁、白豆蔻、党参可能是治疗铝致骨质疏松症的潜在药物。
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