稳定表达HPPE基因的HEK293细胞对骨癌痛大鼠镇痛作用及对PKCγ的影响

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目的建立大鼠骨癌痛模型并鞘内置管,观察鞘内注射稳定表达人前脑啡肽原(HPPE)基因的HEK293细胞(Plv-Ubc-HPPE/HEK293)对骨癌痛大鼠痛觉的影响,探讨其与脊髓背角蛋白激酶Cγ(PKCγ)表达的关系。方法选取40只健康雌性SD大鼠(体重180-200克),随机分为4组(n=10):Naive组(空白对照,大鼠不做任何处理),BCP组(大鼠左侧胫骨行骨癌痛造模手术,鞘内不注入药物),BCP+HEK293组(大鼠左侧胫骨行骨癌痛造模手术,鞘内注入Ubc-GFP-L.V/HEK293细胞),BCP+HPPE组(大鼠左侧胫骨行骨癌痛造模手术,鞘内注入Plv-Ubc-HPPE/HEK293细胞)。对造模成功大鼠进行鞘内穿刺并留置导管。术后第14天开始分别对BCP+HEK293组和BCP+HPPE组大鼠鞘内注射Ubc-GFP-L.V/HEK293细胞悬液和Plv-Ubc-HPPE/HEK293细胞悬液各10μl,每天一次,连续四天。术前1天和从术后3天开始每隔三天测定各组大鼠的热刺激缩足反射潜伏期(Pawwithdrawalthermallatency,PWTL)。术后18天取各组大鼠L4-L6脊髓组织,使用免疫组织化学法检测大鼠脊髓背角PKCγ的表达。结果1)在骨癌痛模型制作前,各组大鼠PWTL无显著差异(P>0.05)。2)在骨癌痛模型制作第9天开始,疼痛导致大鼠PWTL较术前显著降低(P<0.05),并持续下降,与同时间Naive组比较也有统计学差异(P<0.05)。3)鞘内注射细胞后,BCP+HEK293组大鼠PWTL仍继续降低(P<0.05),与BCP组比较无统计学差异(P>0.05)。BCP+HPPE组大鼠PWTL则较BCP组和BCP+HEK293组明显升高(P<0.05)。4)免疫组织化学结果显示:Naive组大鼠腰膨大处(L4-L6)可见PKCγ少量表达,且阳性细胞染色较浅。BCP组和BCP+HEK293组大鼠脊髓背角PKCγ蛋白表达量较Naive组明显增加,差别有统计学意义(P<0.05)。BCP+HPPE组大鼠在鞘内注射Plv-Ubc-HPPE/HEK293细胞后脊髓背角PKCγ的蛋白表达量显著降低,与BCP组和BCP+HEK293组比较差别有统计学意义(P<0.05)。结论1)大鼠行为学表现表明大鼠左侧胫骨骨癌痛模型成功建立。2)大鼠蛛网膜下腔移植稳定表达HPPE基因的Plv-Ubc-HPPE/HEK293细胞,可以较好的减轻骨癌痛大鼠的行为学变化,抑制疼痛过敏反应,能起到较好的镇痛效果。3)大鼠蛛网膜下腔移植稳定表达HPPE基因的Plv-Ubc-HPPE/HEK293细胞后,脊髓背角处PKCγ的蛋白表达量显著降低,说明此细胞产生的镇痛效果可能与PKCγ表达的抑制有关。
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