膀胱肿瘤是泌尿系常见多发的肿瘤之一，临床上治疗方法主要以手术为主，化疗为辅，而研究表明化疗药物主要通过诱导癌细胞的凋亡达到治疗目的，癌细胞对化疗的敏感性决定了治疗的有效性，如何提高癌细胞对化疗的敏感性，降低药用浓度，减少毒副作用仍是我们目前研究的重点之一。C-myc基因是原癌基因，位于第8号染色体长臂，具有促进DNA复制的功能，与细胞的增殖分化有密切关系，c-myc基因表达水平的增高与某些癌瘤的发生有关。在正常细胞中c-myc基因的表达水平是受到严格控制的，一但表达失控将成为导致细胞恶变的重要条件之一。脂质体是由双分于层组成的闭合囊泡，通过细胞的内吞噬作用，将所携带的目的基因导入细胞中。脂质体转染已成为基因转移的常用方法。反义寡核苷酸是与靶基因mRNA互补的DNA分子，能够特异性地抑制靶基因表达而抑制肿瘤细胞繁殖并引起肿瘤细胞凋亡。 我们应用反义c-myc寡核苷酸通过脂质体介导转染到Biu-87细胞24小时后，再用MMC作用已转染了反义c-myc寡核苷酸的Biu-87细胞8小时，了解反义c-myc寡核苷酸和MMC以及联合应用后对Biu-87 第四军医大学博士学位论文 细胞的生物学影响并与正义寡核苦酸作用Biu．87细胞相比较。方法通过 应用细胞计数，Mh’法来评价反义C－p C寡核昔酸导入BiuS7细胞后 对其体外增殖的影响。通过SABC免疫组化DAB显色法了解反义c－myci 寡核苦酸作用于Biu七7细胞后，c－myc癌基因蛋白的表达倩况。通过应 用片段DNA抽提琼脂糖凝胶电泳与流式细胞仪了解反义c－myc寡核苦 酸和 MMC对 Biu七7膀肤癌细胞凋亡的情况，以及联合应用反义 c－myC 寡核昔酸和 MMC作用 Biu－87细胞后，其Biu七7细胞的凋亡情况。结果 显示：脂质体介导反义c－myc寡核昔酸转染Biu七7细胞后与对照组相比， B山－87细胞增殖活性明显受到抑制（P＜0．m）轧小时既达63％门2小时 后就可抑制CqTIVC ＄基因蛋白的表达，显示了脂质体介导反义寡核昔酸 具有良好的导入肿瘤细胞内和封闭c－myc癌基因的效果。用MTT法显 示了反义c－myc寡核若酸与MMC均可抑制Biu七7细胞的增殖。反义 c－myc寡核昔酸导入Biu七7细胞后再用MMC作后月山七7细胞受到明显 的抑制，与其它各对照组细胞相比有显著差异P功刀1＼琼脂糖凝胶电 泳法和流式细胞仪显示了反义c－myc寡核苦酸与M：MC均可引起BiuS7 细胞凋亡，但用脂质体介导反义c－myc寡核昔酸转染到Biu｛7细胞24 ，J’时后，再用MMC作用其8小时，却可引起Bin－87癌细胞大量凋亡， 凋亡率达76．2％，与其他各组相比有显著差异（P＜0．01）。 为了解C－myC癌基因蛋白在膀肤移行细胞癌中表达的临床意 义。我们应用免疫组化SP法检测50例膀脱肿瘤患者术后标本，其中病理 4 第四军医大学博士学位论文 分级1级16例，1互级16例，m级侣例。通过在检验检测三组之间的表 达情况。随访了解c－myc癌基因蛋白表达情况与患者生存、复发和临床 分期的相互关系。结果判断以细胞浆和核染色成棕黄色为阳性标推，显Z 色细胞数大于50％为强阳性，显色细胞数大于5％小于50％为阳性，显 色细胞数小于5％为阴性。结果显示：病理＊级膀脐移行细胞癌标本的 阳性率为 94．4％，病理＊级标本的阳性率 75．0％，病理 1级标本阳性率 为们．肌，三组之间阳性表达率均有显著差异o＜001），经过临床随访发 现在C－CyC癌基因蛋白表达阳性患者人群中死亡率较高，并且C－myc癌 基因蛋白表达与病理分级、临床分期密切相关。 结论：脂质体介导反义c＊yc寡核昔酸能抑制膀脏癌细胞 Bin七7的增殖，且脂质体导入反义C、myC寡核苦酸具有转染率高，方 法简便等特点。脂质体介导反义c－myc寡核昔酸转染Biu七7细胞可明 显增强其对MMC的敏感性。反义c－myC寡核昔酸和MMC均可引起 Bin七7细胞的凋亡。反义c－myc寡核昔酸和MMC联合应用可引起 Biu七7细胞大量凋亡。膀肤移行细胞癌病理分化越低其c－myc癌基因 蛋白表达率越高，而患者的临床预后越差。C－myc癌基因蛋白表达可 以作为患者临床预后的一个参考指标。