论文部分内容阅读
在本论文中，作者从河南省太行山上一株野生灵芝中分离到纯灵芝菌种。其形态学特征为：菌盖软木质，呈肾性，红褐色，表面漆样光亮，有浅褶皱纹；菌肉厚约1cm,有白色管孔；菌柄偏生，红栗褐色；菌丝呈丝状，有分支,菌丝直径为1.7-3.9μm；担孢子褐色，卵圆形，双层壁，外壁光滑，担孢子大小为5.1-6.3μm×7.9-9.4μm。应用真菌ITS特异引物对该菌株ITS序列进行PCR扩增，获得一段长度614bp的序列，经测序并登录GenBank进行Blast比对，并使用MEGA3.1软件的邻近相邻法构建系统发育树，发现该菌株和Ganoderma lucidum (EU520247.1)的ITS序列相似性是100%。结合其形态特征和分子生物学鉴定，确定该菌种是G.lucidum，命名为G.lucidum HSD06B。将该菌株ITS序列提交GenBank，登录号为KC3511557。对菌株G.lucidum HSD06B产漆酶的液态发酵培养基和发酵条件进行了优化。单因素法和响应面法相结合确定其最适液态发酵培养基组成为:葡萄糖38.5g/L，蛋白胨15.0g/L，麸皮21.1g/L，藜芦醇0.8mM/L，多抗霉素0.02g/L，KH2PO41.0g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L。单因素法确定其最佳的发酵条件为：接种量10%，初始pH5.4，转速180r/min，温度28℃。以优化后的发酵培养基在最佳的培养条件下发酵7d，菌株G.lucidum HSD06B产漆酶酶活达到50153U/L，比优化前(5082U/L)提高了约9.7倍。灵芝漆酶粗酶液活性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验表明G.lucidum HSD06B漆酶包含三种同工酶，分别为Lac1、Lac2、Lac3，其中Lac1和Lac2漆酶蛋白的含量比Lac3高。菌株G.lucidum HSD06B粗酶液通过硫酸铵分级沉淀、疏水层析两步分离纯化后，得到三种漆酶复合物，纯化倍数4.6，回收率为38%。G.lucidum HSD06B漆酶同工酶的分子量分别为:Lac1:62.6kDa；Lac2:64.5kDa；Lac3:65.9kDa。初步研究了灵芝漆酶对馒头品质的影响和阐述其改善馒头品质的机理。灵芝漆酶能增加馒头比容，随着漆酶添加量的增加，馒头比容逐渐增大，当漆酶添加量为2.0u/g时，馒头的比容增加11%。馒头感官品质评估结果指出，适量的漆酶能显著改善馒头的感官品质，但馒头感官得分随着酶浓度的增大而降低，在灵芝漆酶添加量为0.5U/g面粉时，馒头感官得分最高（88.5分），这比对照组（76.3分）高出12.2分。此外，和对照组比起来，当漆酶添加量为0.5U/g，馒头气孔更小、更加均匀和有规则，但是，当漆酶浓度>0.5U/g时，馒头气孔明显变大且不规则。馒头质构分析表明漆酶能增加馒头的硬度和咀嚼性，但是对弹性和回复性的影响很小。馒头显微结构分析指出，漆酶可以催化小麦蛋白的交联，改善面筋网络结构，同时伴随着淀粉颗粒的膨大和聚集。SDS-PAGE电泳实验进一步证实漆酶能催化小麦蛋白的交联。以上结果说明漆酶能明显改善馒头的品质，作为一种食品添加剂，具有很广阔的应用前景。