近年,关于维氏气单胞菌感染水产动物的报道屡见不鲜,对水产养殖造成了严重的经济损失。而目前对该细菌引起的疾病,其治疗大多采用化学药物,但是’这些药物污染水体且多残留。细菌灭活疫苗与其它鱼用疫苗相比,绿色、安全、操作简单且成本低。灭活疫苗联合佐剂使用,能使机体持续产生特异性的抗体,提高水产动物的抗病能力。鉴于国内关于该菌灭活疫苗的研究尚浅,本研究将已鉴定的维氏气单胞菌制成灭活疫苗,并提取外膜蛋白制成不同疫苗,以氢氧化铝凝胶作佐剂免疫草鱼,以此探究几种疫苗的免疫效应和该佐剂的免疫增强作用。1维氏气单胞菌的分离鉴定及特性分析本研究致病菌株分离自某渔场发病乌鳢,回归试验分离纯化培养后将该株主要致病菌命名为‘’WLJD-1"。生化鉴定初步确定该菌为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。扩增16S rRNA得到1483bp的目的片段。系统进化树表明该菌与维氏气单胞菌亲缘关系最近,其核苷酸相似性达到99%以上,最终鉴定为维氏气单胞菌。革兰氏染色结果显示该菌为革兰氏阴性短杆菌。对草鱼半致死浓度为2.31×107CFU/ml。40种抗菌药物药敏试验表明该菌对菌必治、先锋霉素、庆大霉素等17种药物敏感；对青霉素G、氨苄西林、羧苄西林等10种药物表现出耐药性。2铝佐剂对维氏气单胞菌灭活疫苗免疫增强作用的研究设置不同温度和不同的福尔马林终浓度,进行灭活检测。得到最适温度为28℃,福尔马林终浓度为0.2%,灭活时间为24h。将铝胶分别按0%,25%和50%体积比添加到全菌灭活疫苗制成3种疫苗,分设3个不同疫苗组,阴性组和空白组。疫苗经安全检测后注射免疫草鱼。于1、7、14、21、28、29、32、35、42d测定血清抗体凝集效价等指标,第28d攻毒。结果显示：疫苗组血清抗体效价均在第21.d达到峰值,50%佐剂组最高,达到1：640；免疫保护率50%佐剂组最高,达到85.71%；疫苗组白细胞数量极显著多于阴性组和空白组(P<0.01),疫苗组显著多于全菌组(P<0.05)；淋巴细胞、粒细胞、单核细胞的百分比上,50%佐剂组平均水平均最大,25%佐剂组次之,均显著高于全菌组、阴性组和空白组(P<0.05)；各疫苗组细胞吞噬率均极显著高于阴性组和空白组(P<0.01),均在第14d出现最大值,50%佐剂组47.4%为最大；酶活性上,佐剂组CAT活力极显著高于对照组(P<0.01),显著高于全菌组(P<0.05),疫苗组AKP活力显著高于对照组(P<0.05),50%佐剂组CAT、AKP平均活力均最高。综上所述,铝佐剂具有较好的免疫增强作用,疫苗组的免疫增强作用大小为：全菌无佐剂组<25%佐剂组<50%佐剂组。3维氏气单胞菌4种疫苗对草鱼免疫原性的研究提取维氏气单胞菌外膜蛋白(OMP), SDS-PAGE电泳检测其条带并标定浓度。分别用维氏气单胞菌全菌灭活苗和OMP制成添加佐剂和不添加佐剂的疫苗4种,佐剂组铝胶按1：1的体积比添加,疫苗均在安全检测后使用。注射免疫草鱼,并在第1、7、14、21、28、35、42、43、46、49、56d分别测定其免疫效果、细胞免疫指标以及酶性指标。第14d二次免疫,第42d攻毒。结果显示：免疫后疫苗组抗体均明显升高,OMP佐剂组平均水平最高,并在第14d和35天达到了1：1280,OMP佐剂组显著高于其它疫苗组(P<0.05); OMP佐剂组免疫保护率最高,达到89.8%.细胞免疫指标方面,4个疫苗免疫组白细胞的平均数量均显著高于阴性组和空白组(P<0.05),佐剂组显著高于为添加佐剂组(P<0.05); OMP佐剂组粒细胞,淋巴细胞,单核细胞水平均显著高于其它组(P<0.05),疫苗组均显著高于阴性组和空白组(P<0.05)；疫苗组细胞吞噬率极显著高于阴性组和对照组(P<0.01),两佐剂组平均水平显著高于未添加佐剂组(P<0.05), OMP佐剂组水平最高,达到46.09%；首次免疫48h后4个疫苗组淋巴细胞S期显著差异于阴性组和空白组(P<0.05)。二次免疫48h后,4个疫苗组的G0/G1期、S期、G2/M期均与阴性组和空白组具有显著性差异(P<0.05)。攻毒后,OMP佐剂组淋巴细胞的复制最快。酶指标方面,疫苗组总超氧化物歧化酶(T-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、碱性磷酸酶(AKP)平均活力均显著高于阴性组和对照组(P<0.05),佐剂组显著高于不添加佐剂组(P<0.05), OMP佐剂组T-SOD和CAT活力的平均水平均最高,AKP活力平均水平则是全菌佐剂组最高。综上所述,OMP佐剂组疫苗激起的机体非特异性免疫最强,免疫效果最好,F-Av佐剂组次之。