用ReaL-Time qPCR方法检测人心房和心室肌组织中成纤维细胞生长因子同源性因子mRNA的表达特征

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成纤维细胞生长因子同源因子(Fibroblast growth factor homologousfactors,FHFs)是成纤维细胞生长因子(Fibroblast Growth Factor,FGF)家族中一种特殊的亚家族,目前主要有FHF1(FGF12)、FHF2(FGF13)、FHF3(FGF11)、FHF4(FGF14)四类,由于可以和细胞内钠离子通道结合,影响通道的表达和功能,因此研究FHFs在人心肌组织中的表达具有重要生理学意义,本实验应用实时RT-PCR技术,检测人心房和心室肌组织中FHFs各亚型mRNA的相对表达含量。  目的:建立检测人心房和心室肌组织中成纤维细胞生长因子同源因子(FHFs)mRNA的实时荧光定量PCR方法,检测人心房和心室肌组织中FHFs的各亚型mRNA的表达特征。  方法:取正常人心房肌和心室肌组织,分别用Trizol法裂解,提取mRNA,用体外反转录技术得到其cDNA,继而用实时荧光定量PCR(real-time qPCR)方法,以cDNA为模版,用FHFs各亚型特异性引物进行扩增,测定FHFs各亚型mRNA在心房肌和心室肌中的相对含量,并用琼脂糖凝胶电泳方法对qPCR产物做定性观测。  结果:人心房肌组织中,以FGF12B的表达占优,其余亚型仅为其表达量的4%或更低;在人心室肌中,以FGF12B的表达占优,FGF13VY/Y表达约为FGF12B的26.7±9%,其余亚型均表达量很低。  结论:在人心房和心室肌组织中,相比于其它FHFs亚型,FGF12B的表达较高,提示FGF12B可能在相应的心肌组织中具有重要的生理学意义。
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