有机磷除草剂莎稗磷酶联免疫检测方法的研究

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:liuji19840718
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除草剂莎稗磷的潜在危害性已经引起了人们的关注,因此建立农产品及环境中莎稗磷残留的快速检测方法具有重要的现实意义。本论文首次建立了一种能准确、怏速检测莎稗磷的酶联免疫检测分析方法,可适用于农产品和环境中莎稗磷残留的高通量快速定量检测。根据莎稗磷的结构特征,设计合成了莎稗磷半抗原,半抗原偶联牛血清白蛋白(BSA)后免疫新西兰大耳兔得到了高特异性(100μg/L莎稗磷抑制率达到59.76%)的多克隆抗血清,效价达1:160000。抗血清经Protein A-Sepharose4B亲和层析柱纯化后用于分析方法的建立。通过对抗体包被浓度、酶标抗原稀释倍数、封闭液种类、竞争时间、竞争温度、样品稀释液种类及pH、离子强度等一系列实验条件的优化,建立了一种能快速有效的检测莎稗磷残留的直接竞争酶联免疫分析方法。该方法检出限IC15为0.1±0.00μg/L,灵敏度IC50为1.0±0.05tg/L,特异性强,与其结构类似物无交叉反应。此外,该方法具有良好的稳定性,扳内和板间变异系数皆<15%。选扦水、土壤及不同谷物样品进行了基质影响消除研究,水样可稀释后直接进行测定,土壤、谷物样品经两倍提取后再经PBST适当稀释即可消除基质影响。样品的加标回收实验中,平均回收率在81.0%-116.9%之间,变异系数<9%,表明了该方去的准确性和稳定性。运用气相色谱对建立的莎稗磷直接竞争酶联免疫分析方法进行了。骓经实验发现,两种方法检测结果具有较高的一致性,R2达0.9795。进一步将方法用于大量实际样品的检测,证明了所建立的莎稗磷直接竞争酶联免疫检测方法可用于农产品及环境样品中莎稗膦的快速准确高通量定量分析。将建立的莎稗磷酶联免疫分析方法应用于从不同地域不同超市收集的42种谷物样品的检测中,结果表明42种样品中莎稗磷残留均小于该方法的检出限,这也从另一方面说明了化合物样品中莎稗磷残留的相对安全性。
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