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目的研究顺式氯氰菊酯对人类乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响以及对其雌激素受体αmRNA和蛋白表达的影响,评价顺式氯氰菊酯体外实验中雌激素活性并初步探讨其拟雌激素作用的机制。方法(1)顺式氯氰菊酯对人类乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响:实验分组:顺式氯氰菊酯分为10-4M、10-5M、10-6M、10-7M、10-8M、10-9M 6个剂量组,阳性对照β-E2分为10-7M、10-9M、10-11M剂量组,以及溶剂对照和空白对照组,细胞消化计数后接种于96孔板,加入含10%去激素小牛血清的无酚红RPMI1640培养基,于37℃、5%CO2培养箱培养隔天换液,共培养5天,加入MTT,测定吸光值,计算细胞增殖率。(2)顺式氯氰菊酯对MCF-7细胞ERαmRNA表达的影响:实验分组:顺式氯氰菊酯分为10-7M、10-8M、10-9M剂量组,阳性对照β-E2分为10-7M、10-9M、10-11M剂量组,以及溶剂对照和空白对照组,48孔板培养5天,培养条件同细胞增殖实验,每孔加入Trizol0.3ml,提取RNA,逆转录,应用实时定量PCR确定mRNA的表达量。(3)顺式氯氰菊酯对MCF-7细胞ERα蛋白表达的影响:实验分组:10-7M顺式氯氰菊酯组,10-7Mβ-E2组以及溶剂对照和空白对照组,6孔板培养5天,培养条件同细胞增殖实验,提取总蛋白做Western blotting,观察蛋白的表达。结果1.顺式氯氰菊酯对MCF-7细胞增殖的影响:不同浓度的顺式氯氰菊酯与溶剂对照组相比,吸光值及细胞增殖率均有差异(P<0.01),经检验有统计学意义:其中10-4M剂量组吸光值和细胞增殖率下降,余各剂量组与溶剂对照组相比均升高;且随着顺式氯氰菊酯浓度的下降(10-5M~10-7M之间),其促进细胞增殖的作用逐渐增强;当浓度低于10-7M时,其促进细胞增殖作用则有减弱趋势。2.顺式氯氰菊酯对MCF-7细胞ERαmRNA表达的影响:10-7M、10-8M、10-9M浓度顺式氯氰菊酯组的ERα基因表达水平分别分别为溶剂对照组的1.61倍、1.45倍和1.39倍;10-7M、10-9M、10-11M浓度阳性对照β-E2组的ERα基因表达水平分别为溶剂对照组的2.07倍、1.89倍和1.83倍;空白对照组的表达水平变化极微,为溶剂对照组的1.02倍。3.顺式氯氰菊酯对MCF-7细胞ERα蛋白表达的影响:与溶剂对照组相比,10-7M Cyp组和10-7Mβ-E2组ERα蛋白相对表达量增多,且其差异有统计学意义(P<0.01);空白对照组的ERα蛋白的相对表达量也有增加,但其差异无统计学意义(P>0.05);10-7M Cyp组与10-7Mβ-E2组比较,ERα蛋白相对表达量减少,且其差异有统计学意义(P<0.05)。结论1.顺式氯氰菊酯在体外实验(MCF-7细胞增殖实验)中可显著促进MCF-7细胞的生长,表现出拟雌激素样作用。2.顺式氯氰菊酯使MCF-7细胞ERαmRNA表达上调,并有剂量反应关系。3.顺式氯氰菊酯使MCF-7细胞ERα蛋白表达上调,提示改变ERα表达水平有可能是其体外实验中拟雌激素作用机制之一。