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哈茨木霉是一种重要的生防真菌，具有拮抗广谱性、适应性强和多重作用机制等特点。实验室早期对哈茨木霉Gα蛋白基因Thga1进行了敲除，发现敲除菌株相对原始菌株分生孢子梗数和分生孢子量显著减少。对野生型菌株和敲除株进行转录组测序，发现C2H2型锌指蛋白类转录因子THA09974表达量下调最大，故对tha09974进行了敲除，获得了敲除突变体THA09974-，发现敲除突变体的菌落特性发生变化。因此，本研究进行tha09974回复，通过回复突变株、敲除突变株和野生型三种菌株的特性比较来探讨该转录因子的功能。取得了如下结果: 1.构建了tha09974基因回复株THA09974+/- 将PCR扩增得到的Pgpda启动子片段、tha09974基因片段、Ttrpc终止子片段通过重叠PCR顺次拼接形成基因表达盒，将其通过infusion酶连接线性化载体pKH-KO-G418得到tha09974基因回复载体，通过酶切和PCR验证了载体正确性。将回复载体pKH-KO-G418-THA09974转化THA09974-获得回复株THA09974+/-。通过PCR和RT-PCR扩增验证了目标基因，绝对荧光定量发现tha09974基因在THA09974+/-中以单拷贝形式存在，证明tha09974基因在THA09974-回复成功，THA09974+/-构建成功。 2.tha09974基因对菌株的生物学特性影响 在PDA培养基上的THA09974-菌落形态颜色更绿;敲除突变株的生长速度和生物量产量较野生型分别下降30％、50％，产孢量较野生型上升100％; THA09974+/-和野生株生长速度和产孢量无显著差异。THA09974-比TH-33果胶酶分泌量高28.9％，THA09974+/-和野生株果胶酶产量无显著差异。说明tha09974基因对菌株产孢和分泌果胶酶有负调控作用，对菌株生长起正调控作用。 3.tha09974基因对菌株的抗逆性影响 在2.4mM Cu2+浓度下，TH-33、THA09974-、THA09974+/-与0mM Cu2+浓度相比，生物量分别减少50％、15.6％和50％，生长速度抑制率分别为78％、75％和80.9％，3种菌株都基本不产孢。说明tha09974基因在2.4m MCu2+胁迫下，对菌株生物量可能起正调控作用，对菌株产孢和生长速度影响不大。在5mM H2O2胁迫下，TH-33、THA09974-、THA09974+/-的产孢量较在0mM H2O2浓度下生物量分别减少36.7％、69％和43％，分别减少65％、78.7％和68％，生长速度抑制率分别达到67％、39％和90％。说明tha09974在H2O2胁迫下可能正调控菌株的产孢和菌丝生物量，对菌株菌丝的生长速度起负调控作用。 4.tha09974基因对菌株拮抗效果的影响 平板拮抗实验表明tha09974敲除突变株相比于野生型TH-33和THA09974+/-对立枯丝核菌的抑制作用增强6％，对3种菌株的纤维素酶产量分别进行了测定，发现THA09974-纤维素酶量产量比TH-33和THA09974+/-分别高40％、39.7％，说明tha09974基因的缺失会增加纤维素酶的分泌量。