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盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)是一种简单的真核单细胞生物,正常状况下以细菌为食,外形如阿米巴虫,也被称为社会阿米巴。在营养充足条件下,盘基网柄菌是以单细胞状态存在的;当发生食物缺乏时,就会进入多细胞发育时期,主要分为细胞聚集、细胞丘、蛞蝓体和子实体四个阶段,最终发育分化成的子实体是由柄细胞和孢子细胞构成。孢子细胞在营养丰富的条件下能够重新萌发,开始新的细胞生活周期;而柄细胞基本上在任何条件下都不能重新生长和繁殖,发生了细胞凋亡。细胞凋亡是生物体在涉及一系列基因的激活、表达以及调控等,更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程,它不同于病理性的细胞死亡。细胞凋亡的调控机制目前尚未完全研究清楚,其过程非常复杂,存在着多种假说和理论,主要分为外源性途径(死亡受体途径)和内源性途径(线粒体途径和内质网途径)。细胞色素c是线粒体电子传递链中一个重要的载体,在能量代谢方面起着重要的作用,但同时也是线粒体途径细胞凋亡信号通路当中一个关键的因子,它可以激活半胱天冬氨酸蛋白家族(caspases)介导的细胞凋亡信号通路,产生一系列的级联反应,最终导致细胞凋亡。细胞色素c在细胞凋亡信号通路中的作用在其他生物已经进行了相关的研究,但在盘基网柄菌细胞凋亡过程中鲜有报道,其调控机制和表达情况目前尚不十分清楚。
盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)是研究发育和致病机理的重要模型,本文首先观察了野生型盘基网柄菌(KAX-3)在多细胞发育时期各个阶段的形态特征,然后笔者利用蛋白免疫印迹和SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法,对野生型盘基网柄菌在16h,18h,20h发育阶段的前柄细胞(prestalk cells)和前孢子细胞(prespore cells)当中细胞色素c基因的表达情况在蛋白水平和分子水平进行检测,研究其在盘基网柄菌细胞凋亡过程中所起的作用。蛋白免疫印迹结果发现:在前柄细胞中,细胞色素c的含量随着细胞凋亡而逐渐增加,在20h达到最大;而前孢子细胞中细胞色素c的水平保持低水平并趋于平稳。用定量PCR技术测得到的结果是:随细胞凋亡的进程,细胞色素C表达量呈递增趋势,前柄细胞中的表达量明显高于前孢子细胞,与蛋白印迹法得到的结果十分相似。结论:两个研究结果相互印证,说明细胞色素c在一定程度上参与了盘基网柄菌前柄细胞的凋亡过程。细胞色素c在盘基网柄菌细胞凋亡过程中的表达量明显增多,并且在细胞凋亡进程中的表达量呈现递增的趋势,表明其与细胞凋亡的发生有着密切的联系,在细胞凋亡过程中发挥着重要的作用。