目的严重发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）是2010年中国疾病预防控制中心分离并确认的一种新病毒。人类感染SFTSV会引起发热伴血小板减少综合征（SFTS）,其主要临床表现是高热、血小板减少、白细胞减少、胃肠道症状和高病死率。多种病原体可导致“发热伴血小板减少”,很难根据临床症状将SFTS与其他具有类似症状的疾病进行区分,因此病原学诊断极为关键。目前,严重发热伴血小板减少综合征的病原学诊断主要依靠病毒分离、抗体检查和核酸检测。病毒分离实验周期长,细胞病变不明显,不适用于临床快速诊断;免疫学检测方法更便宜和方便,但准确性、灵敏度以及检测窗口期较长仍然限制了其在快速诊断中的进一步应用;而PCR,虽具有快速、灵敏度高的特点,但对器材和操作技术要求高,不适用于便携式检测。由于SFTSV主要由蜱叮咬传播,且病例主要出现在医疗条件较差的山林地区。医疗条件的匮乏加上缺乏早期快速便捷的检测手段,这些山林地区的患者常因延迟确诊而导致病情恶化而死亡。因此,为满足快速和便捷的诊断需求,我们开发了一种将CRISPR/Cas12a技术与免疫层析试纸相结合的快速诊断方法。该方法具有很大的现场诊断潜力,可能对SFTSV控制做出重要贡献。方法本研究中,我们将逆转录-环介导等温扩增（RT-LAMP）与CRISPR/Cas12a相结合,建立了一种快速、灵敏、成本低和适用性强的检测方法,该方法运用RTLAMP扩增新型布尼亚病毒核酸,再通过CRISPR/Cas12a平行切割靶序列和ss DNA报告基因,使用免疫层析试纸条捕获标记有FAM荧光素和生物素的ss DNA探针,最终在试纸条上显示出肉眼可见的信号。可在2h内实现新型布尼亚病毒的核酸检测,且不依赖于大型实验室里的贵重仪器,可应用于各类场所,实现便携式检测。结果该方法被证实对SFTSV具有高度特异性,并且与其他RNA病毒未发现交叉反应。将其应用于40份临床血清样本中新布尼亚病毒的核酸检测,以RT-PCR为诊断金标准,该方法具有100%的灵敏度和94.7%的特异度,其最低检测限可达25copies/μL,两者的检测一致率为97.5%。结论本研究基于CRISPR/Cas12a系统建立了一种新型核酸检测方法,并研发了新布尼亚病毒快速检测试剂盒,可在2小时内完成检测,肉眼即可观察结果。可在现场即时检测及资源有限的医疗环境下,为SFTSV核酸检测提供一个有吸引力的选择,有望应用于SFTSV的即时检测及流行病学调查等领域。