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近几年的研究揭示，由于蜕皮激素(ecdysone hormone，EH)的诱导，昆虫在变态发育期幼虫组织细胞将发生自噬(autophagy)和凋亡(apoptosis)的程序性细胞死亡(programmed cell death，PCD)。目前对于昆虫自噬相关基[](autophagy-related gene，Atg)的研究多集中在果蝇、蜜蜂等模式生物上，而在家蚕中尚未见报道。
本文在课题组和西南大学提供的家蚕(Bombyx mori)BmAtgs候选基因序列中，首次由家蚕克隆鉴定到BmAtg3(5、6、12)基因的cDNA序列，并对BmAtg5、BmAtg6基因进行了诱导表达和蛋白分离纯化，为今后制备这些自噬相关蛋白(autophagy-related protein，ATG)的抗体，通过免疫组化和免疫电镜研究家蚕变态期自噬和凋亡的形态发生机制和鉴定这些自噬基因的功能提供前期储备。
本文研究得到的主要结果如下：
(1)通过对果蝇、酵母和哺乳动物自噬相关蛋白及基因在家蚕基因组数据库和EST序列中进行氨基酸同源序列的比对、拼接，得到与酵母中自噬基因Atg3、Atg5、Atg6、Atgl2一致性较高的家蚕拟自噬基因序列BmAtg3(5、6、12)。
(2)取家蚕停止食桑的熟蚕期或吐丝24h的幼虫中肠或丝腺组织，提取总RNA。
根据总RNA的提取质量，选择吐丝24h的幼虫中肠总RNA做为克隆分离BmAtg3(5、6、12)基因的RT-PCR模板。
(3)对Bmatg3(6、12)直接采用RT-PCR获得cDNA序列；对BmAtg5先采用3’端RACE方法由RT-PCR获得BmAtg5的3’端序列，然后进行拼接，再由RT-PCR获得BmAtg5 cDNA序列。对经RT-PCR扩增获得的Bmatg3(5、6、12)cDNA序列克隆至测序载体pGM-T中，进行PCR鉴定和测序鉴定，获得它们的cDNA序列。由各个cDNA序列推导的氨基酸序列与黑腹果蝇、黄蜂、酵母等比对，发现克隆鉴定家蚕自噬相关基因BmAtg3、BmAtg5、BmAtg6、BmAtg12与其相应同源体的序列一致性很高(71～81％)。
(4)通过DNAStar生物学软件对家蚕BmATG3(5、6、12)的二级结构、亲疏水性、抗原性等进行了分析，同时采用Swissmodel软件对BmATG5、BmATG12进行了三维结构的预测，得到了这2个蛋白相互作用的结合位点及BmATG5的钙蛋白酶酶切位点。
(5)将BmAtg5、BmAtg6的cDNA序列亚克隆至表达载体pET-21d中，构建成重组表达质粒pET-21d-BmAtg5、pET．21d-BmAtg6，转化E．coli表达宿主菌BL21(DE3)，对BmAtg5、BmAtg6进行诱导表达。研究了诱导时间、诱导剂浓度、菌液的起始浓度等因素对之表达效率的影响，确定了适宜的诱导表达条件为：对于BmAtg5，在起始菌液OD600=0.5时，用llrrG浓度1.0mmol/L诱导4h；对于BmAtg6，在起始菌液OD600=0.8时，用IPTG浓度0.6mmo儿诱导3h。
(6)可溶性分析结果表明，克隆表达的BmATG5和BmATG6主要为包涵体蛋白，经Western blotting和SDS．PAGE检测，表达的BmATG5和BmATG6蛋白占电泳谱可检测总蛋白的39％以上。
(7)对BmATG5和BmATG6蛋白产物进行Ni.NTA亲和层析纯化、透析脱盐及超滤处理，即可分离纯化到纯度较高的其C-端含有6×His·Tag的BmATG5和BmATG6蛋白。