氧化苦参碱增强鼻咽癌细胞放射敏感性及其机制研究

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【目的】  研究氧化苦参碱对鼻咽癌细胞的增殖抑制作用及放射增敏作用,并初步探讨可能的分子机制。  【方法】  1.采用CCK-8法检测氧化苦参碱对人鼻咽癌细胞株HONE-1、CNE-2增殖的影响。检测用不同浓度氧化苦参碱(0、0.5、1、2、4、8、16mg/ml)处理24h、48h和72h后细胞活力。  2.采用克隆形成实验评估氧化苦参碱对鼻咽癌细胞放射敏感性的作用。培养的人鼻咽癌细胞用含/不含氧化苦参碱(1mg/ml)的培养液培养24h后,用不同剂量(0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy)的X线照射,继续培养7-10天后,计数各个组的克隆形成数并计算放射增敏比。  3.采用Annexin V-FITC/PI双染色法,检测氧化苦参碱联合放射治疗对鼻咽癌细胞凋亡的影响。培养的鼻咽癌细胞用含/不含氧化苦参碱(1mg/ml)的培养液培养24h后,行X线照射0Gy、6Gy,继续培养36h后流式细胞仪检测各种细胞凋亡率。  4.采用荧光探针DCFH-DA标记细胞内活性氧的方法,检测氧化苦参碱联合放射治疗对鼻咽癌细胞内活性氧水平的影响。培养的鼻咽癌细胞用含/不含氧化苦参碱(1mg/ml)的培养液培养24h后,行X线照射0Gy、6Gy,继续培养36h后流式细胞仪检测各种细胞中活性氧水平。  【结果】  1.氧化苦参碱抑制鼻咽癌细胞HONE-1、CNE-2的增殖呈时间-剂量依赖性。  2.氧化苦参碱增强鼻咽癌细胞放射敏感性,HONE-1、CNE-2放射增敏比分别是1.98和1.92。  3. HONE-1和CNE-2细胞氧化苦参碱联合放疗处理组的细胞凋亡率明显高于单纯放疗组(P<0.05)及氧化苦参碱组(P<0.05)。  4. HONE-1和CNE-2细胞氧化苦参碱联合放疗处理组细胞内活性氧水平明显高于单纯放疗组(P<0.05)及氧化苦参碱组(P<0.05)。  【结论】  氧化苦参碱具有增强鼻咽癌细胞放射敏感性的作用,其机制可能与氧化苦参碱增加鼻咽癌细胞内活性氧水平从而增加放疗诱导的细胞凋亡有关,有望成为有效的鼻咽癌放射增敏剂。
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