【摘 要】
：
α-淀粉酶是重要的工业用酶,被普遍应用于食品、制糖、洗涤剂、纺织、造纸、医药等不同的产业中。其中有的行业需要能在低温下表现出高催化效率的α-淀粉酶,也有的行业需要在
论文部分内容阅读
α-淀粉酶是重要的工业用酶,被普遍应用于食品、制糖、洗涤剂、纺织、造纸、医药等不同的产业中。其中有的行业需要能在低温下表现出高催化效率的α-淀粉酶,也有的行业需要在高温下热稳定性好的α-淀粉酶。因此对嗜冷淀粉酶的嗜冷机理研究、以及嗜温淀粉酶的热稳定性改良研究都显得尤为重要。本论文工作主要分两部分:一是从嗜热子囊菌(Thermoascus crustaceus)JCM12803中克隆得到一低温α-淀粉酶的编码基因Tcamy,并成功在毕赤酵母里实现异源表达,其编码的蛋白Tcamy的最适温度为35℃,在0°C下保持有27%的活性,35℃下的比活为262.56 U/mg,以及较好的pH稳定性,这些特性决定了Tcamy有着较好的应用前景;通过同源建模,从N-糖基化、氨基酸组成和分子内部相互作用力三个方面分析了其冷适应性的分子机制,加深了人们对低温α-淀粉酶在结构与功能相互关系上的认识。二是以来自于嗜热篮状菌(Talaromyces leycettanus)JCM12802的α-淀粉酶基因Amy13A的基础上替换一个Linker后构建的突变体工程基因Amy13A21为材料,并基于蛋白表面电荷分布优化的理性设计对Amy13A21进行热稳定性改良,通过酶热稳定性系统(ETSS)的计算结果,确定了可能与热稳定性有关的两个位点Glu87和Tyr280。构建了单点突变E87K、Y280K和组合突变E87K/Y280K并成功进行异源表达和完成酶性质的测定,并与野生型Amy13A21进行了比较。三个突变体的热稳定性都较野生型有所提高,提高幅度为E87K/Y280K>Y280K>E87K。组合突变体E87K/Y280K较野生型Amy13A21的T50和Tm值分别提高了8℃和6.75℃。其催化活力从野生型的80.97 U/mg提高到了161.175U/mg。本论文一是为工业上提供了一个具有潜力的真菌来源的低温α-淀粉酶Tcamy,并以其为研究模型,探讨了其冷适应性机制,一方面可帮助加深我们对低温酶的认识,另一方面可为后续工作中,为基于应用需求为指导的酶分子改良研究提供科学依据。二是以本实验室已构建成功的工程基因Amy13A21为研究对象,基于蛋白表面电荷分布优化的理性设计,在酶活无损失的前提下有效提高了Amy13A21的热稳定性,为酶热稳定性改造提供了一条有效的策略。
其他文献
红外光解离光谱是研究气相团簇离子的常用方法之一。该表征方法灵敏度高,且具有质量选择功能,可以给出离子的振动频率信息。本论文使用激光溅射离子源制备了A_2Fe(CO)_3-(A=Ge,Sn,Pb)负离子和ScNi(CO)_n-(n=2-6)负离子,并使用质谱和红外光解离光谱进行了谱学表征,结合量子化学理论计算,对这些离子开展谱学、结构和成键研究。这对深入认识异核主族金属-过渡金属羰基配合物和钪-过渡
随着社会的发展,教育理念的改变,国家对高校的政策也在不断调整和革新,高校在校人数不断增加,这意味着校园资源的需求也在不断增加。地少人多,都市型高校土地资源紧张成为当
各种波动性的可再生能源大多经过电力电子并网接口向电网输送能量,随着新能源并网发电规模的不断扩大,电力电子并网接口系统日趋于高比例化。然而,高比例的系统呈现出较大的
大型电站和大型电网所带来的供电质量、环境效益以及能源利用率的问题一直没有得到有效的解决。随着社会的发展发达国家提出了分布式能源系统的概念,在我国的一些发达地区也
令M1为一个可数可分解的有限von Neumann代数,τ1为其上的一个忠实正规迹态.我们将证明,如果M1中存在正交酉元列{uk:k:∈ N},则对任意具有忠实正规迹态τ2的有限von Neumann代数M2(≠C),迹自由积(M1,τ1)*(M2,τ2)是Ⅱ1型因子.作为推论我们可以得出,如果M1有一个von Neumann子代数N不包含最小投影,则对任意具有忠实迹态τ2的有限von Neuma
随着中国经济的不断发展,中国在世界经济中的地位不断提高。中国是世界上重要的经济体之一,同时也是世界上最大的进出口贸易国之一,与世界各国之间有着紧密的贸易联系。股票市场是一国经济的晴雨表,同时受到很多投资者的关注。股票市场收益率预测研究不仅对于学术研究有重要意义,而且具有很大的实际应用价值。本文的意义在于发现了中国股票市场收益率对世界各国股票市场收益率具有显著的预测作用,通过实证研究的结果展示了中国
目的:研究姜黄素对非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)细胞活性的影响,和对 NSCLC 上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的作用及其可能的作用
由于超快激光脉冲自身具有很多优秀的特性,使其在很多领域具有广泛的应用。为了对超快激光本身有更加准确的认知,也为了其自身更好的的发展以及在其他领域的更加深入的应用,对于超快激光自身波形的精确测量显得尤为重要。判断一种激光脉冲测量技术是否准确并具有价值,就是看其能否完整而精确地检测出光脉冲本身所提供的全部信息。而以往对于超快脉冲自身波形的测量方法存在着不同的短板,基本无法精确重构出脉冲波形,且过程繁琐
向量优化理论和方法在解决最优决策问题中发挥着重要的作用,广泛地应用于数理经济、通信工程、交通设计和互联网等诸多领域.因此,向量优化理论和方法对诸多应用领域都具有十分重要的指导意义,深入研究其理论和方法能促进社会科技发展.研究向量优化问题需要借助大量的数学工具和方法,涉及到凸分析、最优化基础、变分不等式等多门学科.本文主要研究了向量优化问题Pareto真有效点、Pareto有效点、强有效点的一些充分
近现代建筑多由砖石砌体砌筑而成,灰浆是粘结建筑砖石的重要材料,由于长时间雨水冲刷,低温冻胀等劣化现象,使灰浆与砖石砌体之间粘结力降低、强度下降,对近现代建筑造成严重