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研究背景及目的:乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)感染是影响人类健康的重要问题,据WHO报道,全球约20亿人曾感染HBV,其中2.4亿人为慢性HBV感染者。我国作为乙肝的高流行区,2006年全国乙型肝炎流行病学调查显示我国一般人群HBsAg携带率为7.18%,乙肝病毒携带者约有9000万人。慢性HBV感染可伴有肝纤维化发生,进而可发展为肝硬化、肝癌。目前尚没有特异的药物可以根治乙肝,动物模型对于了解HBV感染的病理生理学、病毒复制的相关机制以及该过程中发生的肝细胞损伤、肝纤维化,药物疗效评价等有重要意义。肝纤维化的动物模型主要有化学法、胆总管结扎、免疫法、尾静脉注射转基因质粒等,但这些模型无法模拟HBV感染的自然史。HBV具有严格的宿主特异性,故目前尚缺乏合适的HBV动物模型。AAV8作为一种嗜肝性病毒,其本身不具有致病性,可作为病毒载体携带HBV进入大鼠肝脏,本研究通过对大鼠注射rAAV8-1.3HBV,观察HBV在大鼠体内的复制以及引起的肝脏病变,旨在探索建立一种新型HBV感染动物模型,为进一步研究HBV复制、致病机制、肝纤维化进展等提供可能。方法:本研究分别对0日龄乳鼠于0、2、4周腹腔注射rAAV8-1.3HBV以及对6周龄成年大鼠尾静脉注射rAAV8-1.3HBV建模。注射rAAV8-1.3HBV后于多个时间节点进行尾静脉采血100～200ul,分离血清,检测大鼠血清中HBsAg、HBeAg、ALT及HBVDNA。12周末处死大鼠,取肝脏。做病理切片,行HE染色及Masson染色,免疫组化检测HBsAg、HBcAg、TGF-β1、α-SMA表达情况,评估肝脏损伤及纤维化情况。结果:乳鼠腹腔注射rAAV8-1.3HBV2周后血中HBsAg和HBeAg均为强阳性,感染率 100%,除 1 只大鼠偏低外,HBsAg 平均 2686.31± 804.39 IU/ml, HBeAg平均63.60±31.60 NCU/ml, 4周时HBsAg和HBeAg较前呈下降趋势,8周和12周时仍有部分大鼠HBsAg和HBeAg保持阳性。对照组HBsAg、HBeAg12周内均为阴性。4周时实验组血中HBVDNA为1.39×105～1.06×107IU/ml,随时间延长,至12周时血中仍可检测到较高拷贝的HBVDNA,表现为4.79×102～3.31×105 IU/ml。肝脏中HBVDNA高于血清中HBVDNA。成年大鼠尾静脉注射rAAV8-1.3HBV后3天血中即可检测出HBsAg阳性,1周时HBsAg较前明显上升,2周后开始下降,至12周基本变为阴性。HBeAg结果与HBsAg表现不同,在注射后3天,rAAV8-1.3HBV组大鼠血中均未检测到HBeAg,第2周时,HBeAg均为阳性,并保持稳定至12周。对照组HBsAg、HBeAg12周内均为阴性。注射rAAV8-1.3HBV8h后,血中可检测到极高拷贝数的HBVDNA,数值在3.47×1010～4.5× 1010IU/ml之间,24h时血中HBVDNA仍维持在1010数量级,从3天开始血中HBVDNA较前下降,但此时血中HBVDNA仍可保持很高的拷贝数,4周时血中HBVDNA为2.20×103～1.12×105IU/ml,之后维持稳定至12周时。病理可见肝脏充血,部分肝细胞水肿,体积变大,排列紊乱,肝窦受压变窄,可见嗜酸性变及散在点状坏死,汇管区略增厚,可见淋巴细胞浸润。免疫组化可见HBsAg、HBcAg阳性肝细胞,α-SMA、TGF-β1明显阳性,提示肝星状细胞活化,纤维化发生。结论:通过注射rAAV8-1.3HBV,HBV可在大鼠肝脏中持续复制并表达,并可引起肝脏损伤及纤维化的发生,该模型有助于了解HBV感染的病理生理学、病毒复制以及研究该过程中发生的肝细胞损伤、肝纤维化的相关机制。