表达人的APP基因的PC12细胞模型的制作及对生长、凋亡的影响

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老年痴呆是老年人的常见病、多发病,构建老年痴呆的细胞模型对研究老年痴呆的病因,病理过程以及筛选防治老年痴呆的新药至关重要。 本文通过构建表达人的APP基因的PC12细胞模型,研究APP蛋白表达对PC12细胞形态、细胞增殖的影响;在氧化应激损伤的不同时间,对细胞生长、凋亡的影响及引起细胞凋亡的信号转导途径。文章用脂质体转染对数生长期的PC12细胞,然后用G418筛选阳性细胞,获得的细胞克隆分为三组:转染PCDNA3的正常对照组;野生型APP转染组和变异的V642I-APP转染组。采用Western印迹法和RT-PCR检测目的基因的蛋白质和mRNA的表达情况。使用细胞形态学方法、MTT法观察转染后对生长的影响。使用MTT观察在无血清培养24h后,100μmol/LH2O2作用的不同时间对PC12细胞的影响。TUNNEL、Hoechst33342观察在无血清培养24h后,100μmol/LH2O2作用24h对PC12细胞凋亡的影响。使用RT-PCR,Western检测了引起细胞凋亡的过程中可能的相关基因P-JNK,FasL的表达。
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