论文部分内容阅读
目的: 通过稀释法药敏试验、血清芽管实验、XTT(甲基四氮盐)减低法等实验方法研究山苍子精油在体外对白色念珠菌生物膜的抑制作用,为防治由白色念珠菌生物膜引起的难治性感染提供新思路。 方法: 1.从临床标本痰、咽拭子、生殖道分泌物、耳拭子中筛选能形成生物膜的白色念珠菌。 2.用XTT减低法观察白色念珠菌生物膜的生长动力学。 3.用结晶紫染色光学显微镜下观察不同阶段白色念珠菌生物膜的形态。 4.通过XTT减低法测定不同浓度EDTA-K2对不同阶段白色念珠菌生物膜的抑制作用,选出适宜浓度作为山苍子精油抑制白色念珠菌生物膜实验的阳性对照。 5.用稀释法药敏试验测定EDTA-K2对白色念珠菌浮游菌的MIC。通过血清芽管实验观察不同浓度的EDTA-K2对白色念珠菌出芽生长的抑制作用,选出适宜浓度作为山苍子精油血清芽管实验的阳性对照。 6.通过XTT减低法测定不同浓度山苍子精油对不同阶段白色念珠菌生物膜的抑制作用。 7.用稀释法药敏试验测定山苍子精油对白色念珠菌浮游菌的MIC。用血清芽管实验观察不同浓度的山苍子精油对酵母细胞出芽生长的抑制作用。 结果: 1.临床收集的40株白色念珠菌,有14株可以形成生物膜,主要来源于痰、咽拭子。 2.在2h-8h,白色念珠菌生物膜的代谢活性逐渐增高,12h-24h增长幅度较大,24h-48h达到高峰保持稳定的代谢活性。 3.白色念珠菌在体外培养条件下24h~48h形成完整的生物膜。 4.EDTA-K2对白色念珠菌浮游菌的MIC为31.250mmol/L。高浓度的EDTA-K2(1000 mmol/L、500mmol/L)不仅可以100%抑制白色念珠菌的出芽生长还具有杀菌作用,15.625mmol/L的EDTA-K2几乎不能抑制芽管生长。 5.500mmol/L、250mmol/L EDTA-K2对2h白色念珠菌生物膜的抑制率为99.3±1.23%、99.1±1.15%,对4h白色念珠菌生物膜的抑制率为95.3±0.91%、95.9±1.13%,对12h、24h、48h生物膜的抑制率小于90%,且随着生物膜的成熟EDTA-K2对其抑制作用越来越差。比较500mmol/L、250mmol/L EDTA-K2对各个时间段生物膜的抑制率,无显著性差异。 6.将山苍子精油组和阳性对照组比较,发现对2h、4h的生物膜,8μl/mL的山苍子精油与阳性对照组的OD值无显著性差异,抑制率>99%;对12h、24h、48h生物膜,4μl/mL的山苍子精油与阳性对照组的OD值无显著性差异,抑制率85%左右。 7.山苍子精油抑制白色念珠菌浮游菌的MIC为0.5μl/mL。大于等于2μl/mL的山苍子精油可以100%抑制白色念珠菌的出芽生长但不具有杀菌作用,0.25μl/mL几乎不能抑制芽管生长。 结论: 1.痰、咽拭子中分离出来的白色念珠菌形成生物膜的能力较强。 2.500mmol/L的EDTA-K2可作为山苍子精油血清芽管抑制实验的阳性对照。 3.250mmol/L的EDTA-K2可作为山苍子精油抑制白色念珠菌生物膜实验的阳性对照。 4.山苍子精油对不同时间段白色念珠菌生物膜均有较好的抑制作用,但随着生物膜的成熟,抑制效果减弱。 5.山苍子精油对白色念珠菌浮游菌的MIC为0.5μl/mL。2μl/mL的山苍子精油可完全抑制白色念珠菌的出芽生长,但没有杀菌作用。说明苍子精油可以抑制初始阶段生物膜的形成,但不能根除酵母细胞。