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第一部分温热化疗对胰腺癌细胞株的促凋亡作用 目的:探讨温热联合顺铂诱导胰腺癌细胞株 capan-2凋亡的最佳温度及半数致死量IC50,并初步阐明其分子机制。 方法: 1.实验分组:按照处理温度将其分成37℃、39℃、41℃、43℃及45℃五组,每一组再按照所加顺铂浓度分成0μg/mL、7.5μg/mL及15μg/mL三小组,一共15小组。 2. MTS实验:检测各处理组细胞的凋亡率,探讨温热联合顺铂诱导胰腺癌细胞株capan-2凋亡的半数致死量IC50、最佳温度及温热与化疗是否有协同作用。 3.流式细胞技术:检测各处理组细胞所处的细胞周期,探讨温热联合顺铂对胰腺癌细胞株capan-2细胞周期的影响。 4.Western blot实验:运用Western blot技术检测各处理组p53及凋亡蛋白(Bax,Bcl-2)表达的情况,比较各处理组三种关键基因表达的差异性,初步探讨温热联合顺铂诱胰腺癌细胞株capan-2凋亡的分子机制。 5.数据分析及统计方法:本研究结果数据分析采用SPSS19.0统计学软件进行处理,定量资料使用均数±标准差(X±S)表示,两组定量资料运用t检验或秩和检验进行比较,多组定量资料运用方差分析或Kruskal-Wallis秩和检验,P<0.05表示有统计学意义。运用Quantity One软件分析Western blot条带灰度,运用Probit回归模型计算温热联合顺铂诱导胰腺癌细胞株capan-2凋亡的半数致死量IC50。 结果: 1.37℃时顺铂诱导胰腺癌细胞株capan-2凋亡的IC50为3.75μg/mL,43℃时顺铂诱导胰腺癌细胞株capan-2凋亡的IC50为2.01μg/mL。 2.在同一温度条件下,随着顺铂浓度的增加,capan-2细胞凋亡率增加;在同一顺铂浓度条件下,随着温度(37℃、39℃、41℃及43℃)的升高,capan-2细胞凋率增加;但43℃与45℃之间无显著差异。 3.温热化疗处理capan-2细胞后,使其细胞周期停滞于G0/G1期。 4.随着温度或顺铂剂量的增加p53及Bax的表达量在增加,Bcl-2的表达受到抑制。 结论: 1.37℃条件下顺铂诱导胰腺癌细胞株capan-2凋亡的IC50为3.75μg/mL;43℃条件下顺铂诱导胰腺癌细胞株capan-2凋亡的IC50为2.01μg/mL。 2.顺铂与温热之间存在协同效应,温热对化疗有增敏作用。 3.在同一顺铂浓度条件下,处理温度从43℃升高到45℃,capan-2细胞凋亡率稍升高,两者之间的差异不显著。而且温度超过43℃会引起肠管坏死,所以温热化疗治疗胰腺癌的最佳温度为43℃。 4.温热化疗诱导胰腺癌细胞株 capan-2凋亡的分子机制可能为,温热化疗通过上调p53及Bax的表达,下调Bcl-2的表达,来实现使细胞周期停滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡。 第二部分精确腹腔热灌注化疗治疗晚期胰腺癌的临床疗效观察 目的:观察精确腹腔热灌注化疗治疗晚期胰腺癌的临床疗效。 方法:对该院收治的36例晚期胰腺癌患者进行回顾性分析,治疗组18例进行腹腔热灌注化疗联合放化疗,对照组18例进行放化疗。比较两组患者近期疗效,KPS评分,不良反应发生率及生存时间之间的差异。 结果:治疗组患者的近期肿瘤减小总有效率为66.67%,对照组患者的近期肿瘤减小总有效率为27.78%,两组治疗有效率之间的差异有统计学意义;治疗后治疗组患者 KPS评分升高幅度明显大于对照组;治疗组与对照组患者不良反应率无显著差异。本组患者中位随访时间为13个月,随访截止时间为2014年5月。治疗组患者中位生总存时间为11个月(7~31月),对照组中位总生存时间为7个月(4~18月),治疗组生存时间显著延长。 结论:腹腔热灌注化疗治疗晚期胰腺癌可显著改善患者生活质量,延长生存期,且不良反应小,值得临床推广应用。