磁性纳米材料固定阿魏酸酯酶及其酶学性质研究

来源 :齐鲁工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Henkel_liu
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阿魏酸酯酶(E.C.3.1.1.73,FAE)又称为肉桂酸酯酶,属于羧酸酯酶(E.C.3.1.1)的亚类。它可以水解交联在半纤维素间及半纤维素与木质素之间的酯键,如细胞壁中低聚阿魏酸酯、阿魏酸甲酯和多糖阿魏酸酯酶中的酯键。其通过水解麦麸等植物组织可以释放阿魏酸,阿魏酸在医药、食品等许多领域有着广泛的应用前景。  磁性纳米材料作为固定化载体具有诸多优点,如体积小、比表面积大、超顺磁性、生物相容性等。由于游离的阿魏酸酯酶的应用会受到诸多限制,本文用磁性纳米材料,运用不同的方法固定阿魏酸酯酶,并研究其酶活性能和实际应用情况。  制备磁性Fe3O4和Fe2O3纳米材料,并对两种材料进行表征,然后用于阿魏酸酯酶的固定。首先对固定化条件进行了优化,Fe3O4固定化酶最优条件为给酶量0.2 mg(1 mg/mL,0.2 mL),Fe3O44 mg,45℃,pH6.0,固定化时间3 h。Fe2O3的最佳固定化温度为25℃,其余条件与Fe3O4固定化酶条件相同。然后对比两种固定化酶的酶学性质,结果发现,阿魏酸酯酶经过固定化之后,耐热性和对 pH的耐受性得到了提高,Fe3O4固定化酶的重复应用性高于Fe2O3固定化酶。  用 APTES、戊二醛对磁性 Fe3O4纳米材料进行修饰,并发现戊二醛浓度为6%时,醛基修饰效果最好。两种修饰性材料表征之后分别用两种材料固定阿魏酸酯酶。结果发现Fe3O4-CHO固定化能力更强,相同质量的固定化酶,Fe3O4-CHO固定化酶表现的酶活是 Fe3O4-NH2固定化酶酶活的两倍多。且 Fe3O4-CHO固定化酶的重复应用性更高,连续应用六次之后仍表现出67%的剩余酶活,而Fe3O4-NH2固定化酶仅余38%。  最后利用上述文中的四种材料Fe3O4、Fe2O3、Fe3O4-NH2和Fe3O4-CHO做载体制备的固定化酶为催化剂,模拟阿魏酸的工业生产。结果显示,固定化酶分解底物—去淀粉麦麸释放阿魏酸的能力不如游离酶,最大的阿魏酸释放率分别为11.25%、8.4%、11.7%和11.4%,而游离酶的阿魏酸释放率为12.38%。而对比四种固定化酶,Fe3O4-NH2固定化酶分解无淀粉麦麸的能力最高,这为日后的工业应用提供了参考。
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