论文部分内容阅读
目的：在中医对痹证（关节炎）辨证论治理论指导下，以氢化可的松和弗氏完全佐剂复合诱导，通过观察一般体征变化和生化指标检测来探索大鼠佐剂性关节炎肾阳虚型模型的建立方法，并探讨指标与病情活动的相关性及临床意义。 方法：Wistar大鼠随机分为正常对照组、关节炎模型组、肾阳虚模型组、关节炎肾阳虚模型组4组。肾阳虚模型组采用氢化可的松皮下注射造模，每日1次，连续20天；关节炎模型组右后足垫皮内注射含卡介苗的弗氏完全佐剂造模；关节炎肾阳虚型模型组采用与肾阳虚模型组相同操作（氢化可的松皮下注射造模），确定建立肾阳虚模型后,与关节炎模型组相同操作（右后足垫皮内注射含卡介苗的弗氏完全佐剂造模）。每4天观察一次动物的一般体征（体重、肛温、饮水、饮食、大小便、脱毛、拱背、蜷缩、激惹反应等），氢化可的松注射造模结束及关节炎造模观察期结束时测大鼠五分钟内自主活动次数，最后一次代谢取尿液检测17-OHCS。实验结束麻醉大鼠，腹腔静脉采血，用于测定各项生化指标；分离肝、脾、肾、肾上腺、胸腺等脏器，称各脏器湿重，计算脏器指数，保存下丘脑和肝脏用于指标检测。酶免法检测血清 IL-4、IL-10水平、TNF-α、VEGF含量、TSH含量、T3、T4水平；酶免法检测检测下丘脑CRH含量、血浆ACTH、CORT含量、血浆cAMP、cGMP含量、肝脏ADK、Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活力。取关节造模侧足跖部多聚甲醛固定，进行HE染色和VEGF、c-Fos免疫组化染色，观察蛋白表达。 结果：①肾阳虚模型动物体征表现为体重明显减轻、直肠肛温降低、饮食量显著减少、有较为严重的脱毛、拱背和蜷缩现象，尿量增多，尿液色黄偏浊，大便出现微湿或溏稀、自主活动明显减少、应激能力明显减弱。②肾阳虚模型大鼠胸腺、肾上腺、垂体、下丘脑与正常对照组比较有显著萎缩；关节炎模型组和关节炎肾阳虚模型组大鼠脾脏指数、睾丸指数均高于正常对照组，肾脏指数、胸腺指数、垂体小于正常对照组。③肾阳虚模型大鼠、关节炎肾阳虚模型大鼠血清TSH含量升高，T3、T4含量降低，下丘脑CRH含量、血浆ACTH含量、cAMP水平和cAMP/cGMP比值均显著降低，cGMP水平显著升高，Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性显著降低；肾阳虚模型大鼠血浆CORT含量、肝脏ADK含量降低，而关节炎肾阳虚模型大鼠血浆CORT含量升高；关节炎模型组肝脏Na+-K+-ATPase活性显著低于正常对照组，而Ca2+-Mg2+-ATPase活性显著高于正常对照组。④关节炎造模的大鼠右足注射弗氏完全佐剂后肿胀，6-10天为肿胀高峰期，到造模20天，肿胀度虽减小，但与正常对照组比较仍有显著性差异；关节炎肾阳虚模型左脚肿胀度大于关节炎模型。⑤关节炎模型组、关节炎肾阳虚模型组IL-10、TNF-α、VEGF的含量显著升高。⑥关节炎模型组、关节炎肾阳虚模型组足跖部VEGF和c-Fos蛋白表达增加。 结论：通过氢化可的松联合弗氏完全佐剂造模建立大鼠佐剂性关节炎肾阳虚的动物模型。该模型具有中医基本理论中对于疾病辩证论治的特点，且符合西医对疾病局部的器质和功能变化及生化病理等临床表现，为进一步开发研制肾阳虚型关节炎的辨证治疗新药提供了可靠的动物模型和依据。