已有研究显示间歇性低氧(intermittent hypoxia,}日)具有抗心肌缺血再灌注(l/R)损伤作用,但其机制尚未阐明。本工作旨在研究NO是否参与lH抗心肌l/R损伤效应,并对其机制进行初步探讨。主要研究结果如下: N0参与介导间歇性低氧抗心肌缺血/再灌注损伤(1)缺血30 min再灌30min,}日组大鼠各项心功能指标的恢复均明显好于常氧组大鼠;(2)NOS非特异性抑制剂L一NNA与iNOS特异性抑制剂AG能够取消lH组大鼠l/R后心功能的改善,而NO供体SN尸促进常氧组大鼠l/R后心功能的恢复;(3)免疫组化结果显示:与常氧大鼠相比,lH大鼠基础状态下iNOS表达增加,而eNOS表达降低;l/R后,lH大鼠iNOS表达降低,而常氧大鼠iNOS表达增加;l/R后lH与常氧大鼠心肌eNOS表达均降低;(4)心肌组织生化检测结果显示:lH大鼠基础状态下NOZ一/N 03一含量高于常氧大鼠;30 min缺血增加常氧大鼠心肌NOZ一/N 03一含量;L一NNA降低lH大鼠心肌缺血期与再灌后NOZ一/N 03一的含量;L一NNA也能降低常氧大鼠心肌缺血期NOZ一/N 03一的含量;(5)与常氧大鼠相比,lH上调了基础状态下iNOS mRNA与蛋白表达,下调了eNOS蛋白表达,但对eNOS mRNA表达无明显影响;缺血期常氧与lH大鼠心肌iNOS和eNOS蛋白表达均降低;但iNOS与eNOS mRNA表达在lH大鼠降低;再灌后,常氧大鼠iNOS mRNA与蛋白表达增加,lH大鼠iNOS mRNA与蛋白虽有恢复,但仍低于基础水平;与常氧相比,lH能更好维持缺血/再灌时eNOS mRNA与蛋白的相对稳定。(6)L一NNA降低基础状态下常氧与lH大鼠心肌iNOS和eNOS mRNA表达;L一NNA显著减少了再灌后lH大鼠iNOS mRNA与蛋白的表达,而对常氧大鼠心肌无明显影响;它也能显著 1<WP=4>抑制再灌后lH大鼠eNOS mRNA表达。(7)AG显著抑制再灌后lH与常氧大鼠iNOS mRNA及lH大鼠iNOS蛋白表达,且其抑制程度lH组大于常氧组。 pKC一。、5而不是a亚基参与介导N0在间歇性低氧抗心肌缺血/再灌注损伤中的作用(1)在基础状态下,与常氧组相比,lH对尸KC一a、。和5胞浆蛋白表达无明显影响,但lH明显增加尸KC一a、。和5胞膜蛋白的表达;L一NNA与SN尸对常氧和lH大鼠尸KC一a、。和5胞浆和胞膜蛋白均无明显影响;(2)缺血期,}日与常氧大鼠尸KC一a胞浆与胞膜蛋白表达均降低;再灌后,两组尸KC一a胞浆、胞膜蛋白恢复至相应基础水平;L一NNA与SN尸对lH与常氧大鼠缺血期和再灌注后尸KC一a的胞浆和胞膜蛋白表达均无明显影响;(3)缺血期,lH与常氧大鼠心肌尸KC一。胞浆和胞膜蛋白均降低,SN尸可增加常氧大鼠胞膜尸KC一。表达,但对lH大鼠胞膜尸KC一。表达无影响,L一NNA可降低lH和常氧大鼠胞膜尸KC一。表达;再灌后,lH大鼠心肌尸KC一。胞膜蛋白高于相应常氧大鼠,且这一差异可被L一NNA消除,SN尸可增加常氧大鼠再灌后尸KC一。胞膜蛋白表达。(4)缺血期,lH与常氧大鼠心肌胞浆和胞膜尸KC一5表达无明显变化,但lH大鼠尸KC一5胞膜/胞浆比值增加,常氧大鼠尸KC一5胞膜/胞浆比值降低;L一NNA降低lH大鼠缺血期与再灌期胞膜尸KC一5表达;SN尸增加常氧大鼠缺血期与再灌期胞膜PKC一5表达。 N卜K Bp65、Fos在lH抗心肌缺血/再灌注损伤中的变化及N0的调节作用(1)基础状态下,常氧与lH大鼠心肌NF一K Bp65和Fos的核蛋白表达无明显差别;缺血期,lH大鼠心肌核蛋白NF一K Bp65和Fos表达明显增加且可被L一NNA拮抗,而常氧大鼠二者无明显变化;再灌后,lH大鼠心肌核蛋白NF一K Bp65和Fos表达未进一步增加,L一NNA可降低其表达;再灌后常氧大鼠心肌核蛋白NF-K Bp65表达增加,Fos表达仍无明显变化,L一NNA也可降低常氧大鼠再灌后NF一K Bp65与Fos表达,但其降低幅度显著小于lH组大鼠。 上述结果表明NO参与lH增加心肌对l/R损伤的耐受,改善l/R导致的心 2<WP=5>中文摘要功能障碍,其机制可能与上调lH大鼠基础状态下iNOS表达,从而增加NO含量,及维持l/R过程中eNOS mRNA与蛋白相对稳定有关。我们的结果还提示lH能够增加心肌尸KC一a、。和5胞膜蛋白的表达,尸KC一。和5而不是a亚基的激活和转位参与NO在间歇性低氧抗心肌缺血/再灌注损伤中的作用;此外NO还可通过调节缺血再灌注期间核NF一K Bp65与Fos表达,进而通过转录因子调节缺血再灌注期间保护性靶基因的表达而发挥其保护作用。