二聚的三齿螯合配体的合成与表征

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固定金属亲和色谱(IMAC)作为一种新型的分离技术,已经是蛋白质分离与纯化的重要手段。然而,在其现实应用中存在致命的弊端:在洗脱蛋白的过程中伴有金属离子的流失,使分离样品受污染,从而制约了其应用。因此,如何确保在蛋白洗脱过程中IMAC柱的稳定性有着十分重要的实践意义。显然,开发新的螯合剂对研究IMAC柱的稳定性具有重要意义。值得注意的是对偶合到基质上的螯合剂进行合成不能被认为是微不足道的事情。二聚的三齿螯合剂对金属离子具有相当强的键合力。可以应用到生物大分子的检测、固定和纯化方面。二聚的螯合剂可以给一个组氨酸标记的生物大分子提供两个相邻的金属离子进行亲和作用,与相应的单体螫合剂相比在键合力度上具有优势。另外,二聚物增加了对具有低金属离子亲和性的无标记的生物大分子的选择性。本文二聚的三齿螯合剂的通式如图(1),Sc是支架或连接结构,至少含有两个官能团与两个三齿螯合剂(TD)发生反应。TD是三齿螯合配体,它的结构式如图(2)。论文第二章设计出了二聚体螯合剂的合成路线。第三章把亚氨基二乙酸和无水乙醇作为起始材料,在酯化之前先经过酰化的方式生成了亚氨基二乙酸二乙酯,其最优反应条件是:醇酸摩尔比12:1,二氯亚砜的用量是0.125mol,反应温度为60℃,反应时间为6h。第四章把得到的亚氨基二乙酸二乙酯作为起始原料,选择生物催化剂猪肝酯酶进行部分水解反应,生成了亚氨基二乙酸单乙酯,其最佳合成条件是:催化剂用量是0.1%,反应温度是28℃,反应时间是12h,缓冲液的浓度是0.184mol/L, pH值是7.5。对上述两种酯选用FT-IR、MS、NMR进行了结构表征。
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