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目的:研究环状RNA分子mmu_circCdyl在Th17细胞分化过程中的作用,分析其可能的作用机制,为调控Th17细胞分化发育寻找新策略。方法:(1)磁珠分选野生型小鼠脾脏来源的初始型T(naive T)细胞,应用抗小鼠CD3/CD28 mAb刺激naive T细胞,设为Th0细胞组;IL-6、TGF-β、IL-23组合诱导naive T细胞向Th17细胞分化,设为Th17细胞组。流式细胞术(Flow cytometry,FCM)分析分选出的细胞纯度和培养体系中Th17细胞的比例,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养体系中上清IL-17A的水平,实时荧光定量PCR(Real-time fluorescene quantitative PCR,qRT-PCR)检测naive T细胞、Th0细胞组、Th17细胞组中以及诱导过程中第0h、24h、48h、72h、96h的circCdyl的含量,琼脂糖凝胶电泳验证qRT-PCR扩增产物。此外,分别检测naive T细胞细胞核和细胞质中circCdyl的含量,确定circCdyl在细胞中的分布。(2)为了确定circCdyl对Th17细胞分化的影响,将si-circCdyl和si-NC转染至naive T细胞,IL-6、TGF-β、IL-23组合诱导转染后的naive T细胞向Th17细胞分化。qRT-PCR检测si-circCdyl的干扰效率,FCM分析培养体系中Th17细胞的比例,ELISA检测培养体系中上清IL-17A的水平,Western-blot检测STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白水平的变化。(3)为了排除Cdyl(Chromodomain on Y-like)对Th17细胞分化的影响,将si-Cdyl和si-NC转染至naive T细胞,IL-6、TGF-β、IL-23组合诱导转染后的naive T细胞向Th17细胞分化。qRT-PCR检测si-Cdyl的干扰效率。FCM分析培养体系中Th17细胞的比例,ELISA检测培养体系中上清IL-17A的水平。(4)分析circCdyl RNA Pull-down蛋白质谱结果,筛选circCdyl结合的RNA结合蛋白。(5)用牛∥型胶原(C-∥)免疫DBA/1小鼠,构建CIA(collagen induced arthritides)小鼠模型。第二次免疫(第21天)后,每隔3天评估一次小鼠发病情况,包括关节发炎情况和CIA发病率。第42天处死小鼠,FCM检测小鼠脾脏中Th17细胞的比例。qRT-PCR检测CIA组和PBS组两组小鼠脾脏CD4~+T细胞中circCdyl的含量。结果:(1)磁珠分选小鼠脾脏naive T细胞的比例在95%以上,诱导Th17细胞比例在10%以上,Th17细胞培养上清中IL-17A的浓度在2000pg/mL以上。Th17细胞组中circCdyl的表达水平显著高于naive T细胞和Th0细胞组(0.01571±0.003 vs0.00214±0.00013 vs 0.003119±0.00057,p<0.05)。circCdyl的表达水平随诱导时间延长而升高。细胞质中circCdyl的含量显著高于细胞核中的含量(p<0.01)。(2)naive T细胞中circCdyl的表达被抑制后,培养体系中Th17细胞的比例明显降低(10.75±1.527%vs 4.76±0.5393%,p<0.01),培养上清中IL-17A的水平明显下降(2207±173.3pg/mL vs 1233±145.3pg/mL,p<0.01),STAT3磷酸化的水平明显下降(p<0.05),表明naive T细胞向Th17细胞分化的能力减弱。naive T细胞中Cdyl的表达被抑制后,培养体系中Th17细胞的比例(9.31±1.34%vs8.347±1.488%)和上清中IL-17A的水平(2208±154.6pg/mL vs 2107±103.3pg/mL)与NC组相比无统计学差异。(3)circCdyl RNA Pull-down蛋白质谱结果表明hnRNP A2B1为circCdyl潜在靶蛋白。(4)CIA小鼠脾脏中Th17细胞的比例显著升高(2.98±0.13%vs 1.88±0.05%,p<0.05)。结论:circCdyl在Th17细胞中高表达,体外敲减naive T细胞中的circCdyl表达可以抑制Th17细胞的分化。