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四环素类(Tetracyclines,TCs)抗生素是由链霉菌产生的一类广谱抗生素,常用于各种动物传染性疾病的治疗以及动物生长促进剂。动物性食品中TC滥用及超标残留给人类健康带来了严重威胁,因此,迫切需要研究能对其进行快速准确的检测方法。本课题合成了TC完全抗原,制备了TC特异性抗体,以此为基础,建立了快速、准确、灵敏的TC残留阻抗型免疫电化学传感检测方法。合成了TC完全免疫原和包被原。对TC苯环上4位和7位碳原子衍生化后,通过重氮化法分别合成了TC免疫原和包被原。同时对载体蛋白BSA进行了羧基化,减少BSA自身的偶联,提高所合成抗原的纯度及偶联比。经过HPLC-MASS、凝胶色谱、红外图谱、紫外图谱鉴定,免疫原和包被原均合成成功,且由羧基化的BSA制备的免疫原(TC-aBSA)比未经羧基化的BSA制备的免疫原(TC-BSA)偶联比高,分别为11:1和7:1,包被原的偶联比为5:1。制备了TC特异性抗体并通过间接竞争ELISA方法对抗体进行了表征。用制备的TC免疫原TC-BSA和TC-aBSA各免疫两只新西兰大白兔,其中三只产生了针对TC的抗血清,经硫酸铵法初步纯化后,效价分别为14.4万、25.6万、32万左右。取效价为32万的抗血清建立间接竞争ELISA法,测得OD450值与TC标准品浓度在40～120 ng/kg范围内呈线性关系,线性回归方程为:Y=-0.0064X+1.1308,R2=0.9937,TC的半数抑制率IC50为97μg/kg,与土霉素(OTC)、金霉素(CTC)的交叉反应率分别为100%和85%。建立了基于阻抗技术和纳米材料的电化学免疫传感检测方法。以制备的TC抗体为识别元件,通过L-半胱氨酸(L-Cys)和纳米金(Nano-Au)自组装技术设计传感器界面固定抗体,通过电化学交流阻抗技术,建立了快速、准确、灵敏的TC免疫电化学传感检测方法。实验得出工作电极修饰的最佳条件如下:L-Cys自组装浓度为0.5%,pH值为4.5,时间为2 h;自组装Nano-Au粒径为20 nm,pH 6.0;抗体包被浓度为100μg/mL,pH 7.0,时间为1 h;1% BSA封闭时间为40min;优化后阻抗测定初始电压为0.2 V。本方法室温下检测时间为15 min,对TC的响应线性范围为5～85μg/kg,最低检测限1μg/kg。鸡肉中样品加标回收率平均为79.37%,工作电极保存一个月以内性能稳定,偏差在5%以内。