草鱼出血病是我国养殖草鱼最为严重的病毒性疾病，其病原为草鱼呼肠孤病毒（grass carp reovirus，GCRV）。草鱼出血病流行范围广，持续时间长，死亡率高，对草鱼养殖业造成了巨大的经济损失，严重威胁我国草鱼养殖业的健康发展。因此，研究草鱼出血病的有效防治措施对草鱼养殖业具有重要意义。疫苗免疫是预防草鱼出血病最为有效的方法，目前，草鱼主要以注射免疫或浸泡免疫为主。口服疫苗免疫接种方便，不受鱼体大小、养殖规模等条件限制，越来越受到研究人员关注。但是，口服疫苗因疫苗抗原蛋白易受消化系统酶的破坏，而导致其研究与应用受到限制。疫苗微囊化技术的发展与应用，降低了疫苗抗原的损失，提高了疫苗的免疫效果，因此，微囊疫苗的研究逐渐受到重视。本研究以海藻酸钠、壳聚糖为微囊壁材，以草鱼出血病细胞培养灭活疫苗为微囊芯材，采用复凝聚法研究了海藻酸钠-壳聚糖（SA-CS）微囊疫苗的制备工艺。首先，通过单因素试验，研究了海藻酸钠浓度、壳聚糖浓度、氯化钙浓度、壳聚糖溶液pH以及加入疫苗体积五个因素对微囊疫苗包封率的影响。然后，在单因素试验的基础上，通过正交试验筛选，优化了草鱼出血病口服微囊疫苗的制备工艺，并确定其最佳制备工艺；最后，通过微囊疫苗的外观观察和体外释放试验，研究了微囊疫苗的外观形态、释放性能以及耐酸碱性能。单因素试验结果显示，在制备SA-CS微囊疫苗时，海藻酸钠浓度宜保持在1.5%左右，壳聚糖浓度宜保持在1%左右，壳聚糖溶液pH宜保持在4-5之间，氯化钙浓度宜保持在4%左右，最适加入疫苗体积为2mL；正交试验筛选结果显示，各因素对草鱼出血病微囊疫苗包封率的影响程度由大到小依次为：海藻酸钠浓度＞疫苗加入量＞壳聚糖浓度＞氯化钙浓度，制备草鱼出血病微囊疫苗的最佳工艺为：海藻酸钠浓度1.5%，壳聚糖浓度1%，氯化钙浓度4%，加入疫苗体积2mL；微囊疫苗体外性能研究显示，光镜下观察微囊呈类圆形，平均粒径为（7.02±3.95）μm，平均包封率为60.53%，平均载蛋白量为8.12mg/g，在pH7.4的PBS溶液、生理盐水溶液中具有良好的释放性能。将保存不同时间的SA-CS微囊疫苗分别口服免疫草鱼，通过检测血清中和抗体效价，研究该微囊疫苗的稳定性；经过鱼体免疫，以间接荧光免疫技术证实该疫苗能够被草鱼肠道摄取；免疫草鱼后，在不同时间点分别取草鱼的血液和内脏组织（肝、脾、肾），通过检测血清中和抗体效价，比较微囊免疫组、细胞疫苗口服组和对照组血清抗体效价水平的差异，并采用实时荧光相对定量法检测草鱼免疫相关基因IgM、Mx的表达量差异，从而确定该微囊疫苗的免疫效果；通过草鱼呼肠孤病毒GCRV104攻毒试验，确定该微囊疫苗的免疫保护力。SA-CS微囊疫苗稳定性研究结果表明，保存1个月、3个月、6个月的SA-CS微囊疫苗在免疫草鱼后，3个组的血清中和抗体效价检测无显著性差异（P＞0.05），说明微囊疫苗可在4℃条件下保存6个月；免疫草鱼后，血清抗体效价检测结果显示，在第7d，免疫组抗体水平显著上升，细胞疫苗口服组的抗体水平（83.61±11.02）显著高于SA-CS微囊疫苗组（69.72±2.37）（P＜0.05）；在第14d，免疫组均维持在较高的水平，差异不显著（P＞0.05）；第21d时，SA-CS微囊疫苗组（101.56±4.28）显著高于细胞疫苗组（79.89±9.04）（P＜0.05）。免疫相关基因表达检测结果显示，免疫组IgM在免疫7d后，显著高于对照组（P＜0.05），而在第14d后，差异极显著（P＜0.01）；而Mx表达量在免疫3d后显著高于对照组（P＜0.05），第7d后，差异极显著（P＜0.01）。攻毒试验研究结果显示，SA-CS微囊疫苗免疫组的草鱼死亡率低于对照组，该微囊疫苗的相对免疫保护力（RPS）为62.5%。