【摘 要】
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为了研究胡杨耐盐碱的分子机理,以正常生长和用4﹪NaHCO(W/V)处理过的胡杨为研究对象,利用mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术,通过Reverse Northern杂交获得差异表达片段,并对基因片
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为了研究胡杨耐盐碱的分子机理,以正常生长和用4﹪NaHCO<,3>(W/V)处理过的胡杨为研究对象,利用mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术,通过Reverse Northern杂交获得差异表达片段,并对基因片段测序和序列分析等研究.所得结果如下:(1)胡杨在受到4﹪NaHCO<,3>溶液处理后有特异基因表达.用NaHCO<,3>溶液浇灌胡杨苗3天后,取胡杨叶片进行mRNA差异显示,研究表明NaHCO<,3>溶液处理后出现基因的差异表达.(2)CTAB法提取胡杨组织的RNA质量高、完整性好,完全适用于DDRT-PCR,是一种快速、可靠的树木RNA提取方法.(3)建立了胡杨的mRNA差异显示的体系.利用三种锚定引物和16种10碱基随机引物组合,展示了胡杨正常条件下和盐碱条件下基因表达差异方式.用银染法代替了放射性标记检测,操作起来更安全易行.该方法与Reverse Northern斑点杂交结合使用,并进行多次重复操作,可很好地克服其假阳性高的缺点.(4)共获了24个差异条带的克隆.经Reverse Northern杂交获得了4个阳性克隆.对其进行测序,序列相似性分析表明T<,12>C-P1片段与atpH基因(该基因编码ATPase的一个亚基)有很高同源性,为重要的抗盐碱基因;T<,12>G-P6片段与已知蛋白序列同源性较低;T<,12>C-AP4序列与WD-40重复蛋白基因同源性较高;T<,12>A-AP4片段与钠离子通道蛋白基因有一定同源性,为抗盐碱相关基因.
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