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猪圆环病毒2型（PCV2）是近来发现严重影响养猪业的一种猪源病毒，生产实践中常与多种病原混合感染，造成形式多样、病理复杂的临床症状，尤其是断乳仔猪的腹泻、呼吸困难、严重消瘦、贫血，偶尔伴有黄疸，随着其感染的病原不同，死亡率也有很大差异。从文献报道可知，PCV2各毒株与地域和时间没有明显的相关关系，但的确存在核苷酸序列差异，这对其生物学特征有何影响还未有定论。 为了了解我国PCV2株的生物学特点，我们从当地患有严重消瘦和贫血的仔猪抗凝血中利用体外培养技术分离到一株PCV2病毒，并构建了基因组重组克隆pMDT-PCV。将分离株命名为JXL，登录GenBank，登录号为AY491310。通过序列分析，与参考株比较出现了内切酶位点的突变，如ClaI和XbaI的缺失。选取不同地域的毒株比较，与包括美国的34464株、台湾Chia-Yi株、德国IAF-4370株和加拿大24657 NL株在内的不同地域比较，核苷酸同源性分别为95.5％、93.9％、95.6％和99.5％，证明地域不同与毒株核苷酸序列保守性没有明显的相关性。 由于从病料分离的PCV2毒株常混有猪细小病毒、猪繁殖和呼吸综合征病毒以及内源性的PCV1病毒等，为了准确地研究PCV2病毒单因子自身在复制和致病性等方面的作用机制，我们将pMDT-PCV分子DNA克隆转染PK15细胞系，其衍生病毒可与PCV2多抗血清在间接免疫荧光抗体试验中（IFA）显示特异性的荧光，表明具有体外感染性。 在此基础上，通过腹股沟淋巴结接种3头30日龄仔猪pMDT-PCV分子DNA，每头每次500ng，分别免疫2或3次，1头共圈饲养观察有无水平感染。发现50天后，接种猪血清的荧光抗体效价在1：500以上，淋巴组织中淋巴小结数增多，生发中心和副皮质区的淋巴细胞数减少，结构模糊：肝淤血，窦内淋巴样细胞浸润；肺细支气管周围淋巴细胞浸润，个别地方有小肺炎灶，肺泡膈增宽；心脏和肾末见明显异常。用免疫3次猪的剖杀猪血清检测组织中的特异性抗原，发现在肾小球和淋巴结的生发中心存在大量的抗原物质。但利用套式PCR始终未从血清中扩增出PCV2特异性片断，说明病毒的复制能力较弱或者病毒血症持续时间非常短。共圈饲养的空白对照猪，出现了轻微的组织学变化，从肾和淋巴结中也存在少量的荧光特异性抗原，血清抗体效价为1：250，表明发生了水平感染。 分子DNA克隆的体内、体外接种试验表明，pMDT-PCV具有感染性，能通过衍生病毒的复制对猪淋巴器官产生轻微病变，但不表现临床症状，反映了PCV2病毒的复制能力差、致病性弱等特性，也说明临床上发生的PCV2相关疾病需要其它病原或刺激剂的共同作用。 PCV2主要编码2种蛋白，与复制相关的ORF1编码Rep蛋白和唯一的结构蛋白由ORF2编码。为了方便深入研究PCV2，设计并合成3对引物，通过PCR博七后出站报告中文摘要中国农科院研究生院扩增出PCVZ完整的ORFI基因和ORFZ基因的N一末端（PCV737-42;）和C一末端（PCV4213:），并根据T-A原理构建成功转移载体pMDT-O好1、pMDT-PC叭3742，和pMD下PCV42，一37。在此基础上，分别利用带有6xHis残基的原核表达系统PPROHTb载体在大肠杆菌DH5a中构建了重组质粒pPRO.R印，融合表达为重组蛋白His一R叩;利用带有谷肤普肤一S一转移酶的pGEX一6p一1载体在BL21中构建了重组质粒pGEX一PCv737一t和pGEX一PCV42卜3:，融合表达为重组蛋白GsT-PcV737、2，和GsT-pcv421一3:。利用超声波破碎的重组菌pGEx一PCV421一7菌体蛋白，1:50稀释时包被酶标检测板，建立了间接ELISA方法，与1:1000稀释的PCVZ标准阳性血清和阴性血清的P加比值高达2.11，表明可用于PCVZ的血清学诊断。将通过SDS一聚丙烯酞胺凝胶电泳（SDS一PAGE）初步纯化的重组蛋白GST-PCV737、2，和GST-PCV42，一3:分别免疫BALB/e小鼠，获得的鼠抗血清1:40稀释时，均可通过.正A检测出PK15细胞培养的PCVZ病毒，表明重组蛋白具有针对病毒的反应原性。 利用SDS一队GE初步纯化的重组外源蛋白GST-PCV737421，免疫BALB/c小鼠。取脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合后，通过正A筛选，获得5个PCVZ特异性单克隆抗体分泌细胞株，2F10、3G2、4G3、4G4和4E12。通过体内诱生法大量生产抗体，测得各单抗腹水的正A效价约为1:2000。对单抗3G2进行染色体分析，染色体数约为80对左右。3G2腹水1:100稀释时能从重组菌pGEx一PCV737、2、菌体总蛋白中利用蛋白印迹试验（Western七lot）清晰地检测出重组蛋白GST-PCV737书l。 通过扩增PCVZ ORFZ基因，利用质粒载体pE下30a构建了重组克隆PET-caP，在此基础上，利用ORFZ基因中421位的Ec口RJ位点，插入无同源性的猪生长抑素基因（somatostain，55）约1 SObP片段，构建了PCvZ竞争性PCR模板。通过琼脂糖凝胶电泳，可利用澳化乙锭染色区别出880bp的竞争片段CaP一SS和700bP的目的片段CaP，建立了PCVZ竞争性PCR方法。并用此方法，测得本研究中通过组织培养和超速离心获得的病毒粒子达10’5拷贝/微升。 本研究通过大量细致的基础工作，制备了血清学诊断和病原学诊断的基础试hlJ，为下一步寻找PCVZ抗原表位和建立鉴别诊断试剂以及进行对病毒进行量化研究提供了条件。