鼻咽癌(NPC)作为与EB病毒感染密切相关的头颈部肿瘤对放射治疗敏感，使得放疗成为未转移鼻咽癌患者的首选根治性治疗手段。虽然近年来放射治疗技术的进步、化疗及靶点药物等综合治疗方法的应用，在一定程度上提高了肿瘤的局部控制率，减轻了周围正常组织的不良放疗反应，但是患者5年生存率仍然徘徊在60％左右，局部晚期患者甚至更低。本研究分为六个部分：　　 第一章：25种分子标记物在鼻咽癌中的表达检测及数据预处理。　　 目的：检测25种分子标记物在局部晚期鼻咽癌组织中的表达情况，通过半定量评分量化各分子在组织中的表达水平，并对各分子的表达与患者预后关系进行初步探讨。　　 方法：通过免疫组织化学染色方法检测了HIF-1α，Aurora-A，Beclin1，EZH2，E-Cadherin，N-Cadherin,CENP-H，cyclin Dl，Stathmin,β-catenin,Survivin，MMP-2，c-Met，Ki-67，P21，CDC2，Bcl-2，COX-2，nm23-H1，Bax，Snail，Twist,ERK，P27及TIMP-2等25种分子标记物的表达水平。　　 结果：ROC曲线分析结果显示：在诱导+放疗组患者(IC/RT)，Aurora-A、Beclin1、Bcl-2、MMP-2、CENP-H、Stathmin、N-Cadherin、Bax、P27及TIMP-2对患者治疗后5年的生存状态(生存VS死亡)具有较高的预测价值;在诱导+同期放化疗组(IC/CRT)患者，Aurora-A、Beclin1、HIF-1α、Bcl-2及c-Met对患者治疗后5年的生存状态具有较高的预测价值。　　 结论：本部分研究通过免疫组织化学染色技术结合量化评分，并通过ROC曲线及Kaplan-Meier生存分析初步鉴别出Aurora-A、Bcl-2、P27、TIMP-2、Beclin1、MMP-2及HIF-1α等分子对局部晚期鼻咽癌患者具有较高的生存状态预测能力，这些预后分子将为随后SVM模型的建立提供数模基础。　　 第二章：局部晚期鼻咽癌患者5年生存状态SVM预后模型的建立。　　 目的：设计SVM个体化预后预测模型，并测试其对局部晚期鼻咽癌患者治疗后5年生存状态的预测能力。　　 方法：选取25种分子标记物评分均齐全的120例(IC/RT及IC/CRT各60例)患者作为研究对象。将第一章中筛选出来的Aurora-A、Bcl-2、P27、TIMP-2、Beclin1、MMP-2、HIF-1α、COX2、患者的血清学指标VCA-IgA及EA-IgA等共计10种因子纳入SVM模型设计，并分别针对IC/RT组患者、IC/CRT组患者及所有患者(IC/RT+IC/CRT)设计了相应的SVM预后预测模型-SVM1、SVM2及SVM3。　　 结果：测试集测试结果表明：SVM1模型的阳性预测值为67.6％，阴性预测值为85.7％，敏感性为81.3％，特异性为87.0％，总准确率为85.5％。　　 结论：基于Aurora-A、Bcl-2、P27、TIMP-2、Beclin1、MMP-2、HIF-1α、VCA-IgA及EA-IgA等分子设计的SVM预后预测模型对IC/RT、IC/CRT及两组患者的5年生存状态具有较高的个体化预测能力。　　 第三章：Aurora-A激酶在鼻咽癌中的表达水平及其临床意义。　　 目的：明确Aurora-A激酶在鼻咽癌中的表达水平，分析其与患者各临床指标，尤其是与预后指标间的关系，为随后基于此的靶向治疗提供坚实的理论基础。　　 方法：所需肿瘤组织来自于本研究第一部分第一章患者，利用免疫组织化学染色的方法我们检测了145例局部晚期鼻咽癌患者组织中Aurora-A激酶的表达水平。同时，应用Western Blot及RT-PCR我们检测了鼻咽癌细胞株，8例患者鼻咽癌及癌旁正常组织中Aurora-A的表达水平。　　 结果：组织及细胞水平研究表明，Aurora-A蛋白及mRNA在鼻咽癌组织及细胞水平表达显著高于正常鼻咽上皮，Aurora-A在IC/RT及IC/CRT患者组织中的高表达与患者较短的总生存时间(OS)、无进展生存时间(PFS)及无转移生存时间(DMFS)显著相关，Aurora-A蛋白高表达是局部晚期鼻咽癌患者OS，PFS及DMFS的负性预后因子。　　 结论：Aurora-A蛋白及mRNA在鼻咽癌组织及细胞水平表达显著高于正常鼻咽上皮，其高表达是局部晚期鼻咽癌患者OS，PFS及DMFS的负性预后因子。　　 第四章：靶向Aurora-A抑制鼻咽癌细胞生长并诱导其凋亡机制的研究。　　 目的：通过应用Aurora-A激酶的小分子抑制剂VX-680作用于鼻咽癌CNE-2细胞，检测VX-680对鼻咽癌细胞生长增殖及凋亡诱导作用，以明确该小分子抑制剂靶向治疗鼻咽癌的作用。　　 方法：将Aurora-A激酶的小分子抑制剂VX-680作用于鼻咽癌CNE-2细胞株观察其生长抑制情况。首先，通过Western blot及免疫细胞荧光染色的方法检测磷酸化Aurora-A激酶(Thr288)的表达情况，明确VX-680对Aurora-A激酶活性的抑制作用；利用MTT法检测VX-680对CNE-2细胞生长增殖的抑制作用；通过流式细胞技术及Western blot检测凋亡标志蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3的表达情况，探讨VX-680对鼻咽癌CNE-2细胞是否具有凋亡诱导作用；最终明确特异性靶向抑制Aurora-A激酶对鼻咽癌的潜在治疗价值。　　 结果：VX-680对CNE-2细胞的Aurora-A激酶的自身磷酸化抑制作用在较低浓度即可实现(1-2 nM)，而对Aurora-B激酶的天然底物Histone H3的磷酸化抑制作用则需较高浓度(5 nM)，可见VX-680对鼻咽癌细胞的Aurora-A激酶具有选择性抑制作用。VX-680可剂量依赖性地抑制鼻咽癌CNE-2细胞的生长增殖，究其机制在于VX-680一方面通过抑制Aurora-A使细胞周期阻滞于G2/M期，另一方面VX-680可诱导细胞凋亡。　　 结论：VX-680对Aurora-A激酶具有更强烈的选择性抑制作用。VX-680可通过阻滞细胞周期于G2/M并诱导线粒体途径的细胞凋亡双重途径抑制细胞的生长增殖。因而，VX-680有望成为鼻咽癌未来靶向治疗中的新颖选择。　　 第五章：Aurora-A激酶促进鼻咽癌细胞迁徙转移机制的研究。　　 目的：明确Aurora-A激酶在鼻咽癌细胞迁徙转移过程中的重要作用，并阐明其分子机制。　　 方法：通过基因转染及RNAi技术，构建Aurora-A高表达、突变失活及低表达的CNE-2细胞。应用细胞免疫荧光方法检测细胞迁徙转移关键步骤—上皮间质转化(Epithelial-Methenchymal Transition,EMT)的标志性分子(如胞膜E-Cadherin,β-catenin等)在Aurora-A高表达/低表达/突变失活时表达情况;通过Transwell小室检测Aurora-A高表达/低表达/突变失活时，鼻咽癌细胞的体外迁徙转移能力的改变情况。　　 结果：体外细胞水平研究表明：Aurora-A通过MAPK1/2信号途径实现其对鼻咽癌细胞EMT、侵袭及迁徙转移的调节作用。Western blot检测显示MAPK1/2的表达水平与Aurora-A的表达水平呈正向相关，抑制MAPK1/2或Aurora-A可获得相似的细胞表型，如：EMT逆转、侵袭及迁徙转移能力下降等。　　 结论：与体内研究结果相吻合的是：Aurora-A在体外水平可增强鼻咽癌CNE-2细胞的EMT、侵袭及迁徙转移能力。而Aurora-A上述恶性表型的获得是通过MAPK1/2信号途径实现的。该分子机制的阐明提示我们：靶向Aurora-A不仅可抑制鼻咽癌细胞生长增殖、诱导凋亡，而且可靶向逆转细胞EMT表型、抑制细胞侵袭及转移能力，充分证明了Aurora-A在鼻咽癌发生发展过程中的多维作用机制，进一步表明靶向Aurora-A在鼻咽癌治疗中的光明应用前景。　　 第六章：VX-680对鼻咽癌细胞的放疗增敏机制的研究。　　 目的：将VX-680与放射线同时作用于鼻咽癌细胞，探讨VX-680是否具有放疗增敏作用，并探讨其分子机制，评价其临床应用潜能。　　 方法：将VX-680与放射线同时处理鼻咽癌细胞，利用克隆形成实验观察鼻咽癌细胞的存活特点，从而明确其对射线的敏感性改变情况；应用Western blot及流式细胞技术检测细胞周期及射线敏感蛋白的表达情况，阐明VX-680增加鼻咽癌细胞放射线敏感性的分子机制。　　 结果：CNE-2细胞经1-2 nM的VX-680预处理24小时，另经12天左右的生长增殖后，平均有88.5％及85.2％的细胞存活；单独予以1Gy剂量的放射线照射另经12天左右的生长增殖，约有89.3％的细胞存活；1Gy+1/2 nM VX-680联合处理并经12天左右的生长增殖后，分别有68.8％及53.2％的细胞存活。　　 结论：Aurora-A小分子抑制剂VX-680联合放射线通过上调P53及P21的表达增加鼻咽癌细胞的放疗敏感性，进一步证明了VX-680在鼻咽癌治疗中的光明应用前景。