背景和目的:研究表明,脂质代谢重编程已经成为恶性肿瘤典型的生物学特征。许多证据证明,ATP柠檬酸裂解酶（ATP citrate lyase,ACLY）是脂质代谢中的一个关键酶,其在能量代谢和脂质合成中起着重要作用。许多研究显示,ACLY在多种肿瘤中均异常表达,其药理或基因抑制能显著抑制癌细胞增殖并且诱导凋亡。然而ACLY在食管鳞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中的作用尚不清楚。本研究的目的旨在探讨ACLY抑制剂BMS-303141或ACLY的过表达对ESCC细胞增殖、迁移、侵袭和脂质合成的影响,探究了ACLY的乙酰化修饰对其功能的影响,深入研究其促进肿瘤生长的分子机制,该研究为以ACLY为靶点的ESCC患者的靶向治疗提供新的治疗策略。方法1.ACLY在ESCC中表达分析:利用生物信息学方法分析TCGA的三个数据库Star Base v3.0、UALCAN和GEPIA中ACLY在食管癌中的差异表达;采用Western blot以及q RT-PCR检测ESCC细胞和正常食管上皮细胞Het-1A中的ACLY的蛋白及m RNA水平;并采用q RT-PCR检测了31例ESCC组织和配对正常组织中ACLY的差异表达。2.ACLY在ESCC中的功能分析:采用Western blot检测BMS-303141和ACLY过表达对ESCC细胞ACLY表达的影响;采用CCK-8、Ed U以及克隆形成实验、Transwell小室和尼罗红染色分别检测ACLY的抑制和过表达对细胞增殖、细胞迁移、细胞侵袭、脂质含量的影响;采用Western blot分析ACLY的抑制和过表达对脂代谢相关酶ACS、ACC1、FASN、MOGAT2、SREBF1蛋白水平的影响;采用裸鼠移植瘤实验检测ACLY的抑制和过表达对肿瘤生长的影响,并采用Western blot检测肿瘤组织中脂质代谢相关蛋白的表达。3.沉默信息调节因子2（Silent information regulator of transcription 2,SIRT2）介导ACLY去乙酰化促进ESCC进展及其分子机制分析:利用Co-IP实验验证ACLY是否具有乙酰化修饰,并筛选与ACLY互作的去乙酰化酶和乙酰转移酶;Western blot检测ACLY抑制剂对SIRT2的影响,以及SIRT2抑制剂对ACLY的影响;检测SIRT2抑制剂AGK2对ESCC增殖和ACLY乙酰化水平的影响;CCK-8、Ed U和Transwell检测过表达ACLY是否会部分逆转AGK2对ESCC增殖和迁移的抑制。4.统计学分析:实验数据采用Graph Pad Prism 8.0统计学软件进行分析。数据表示为平均值±标准差（mean±standard deviation）。对于服从正态分布和方差齐性的两组样本均数的比较采用Student’s t检验,反之则采用Mann-Whitney U非参数检验;三组及以上比较采用One-way ANOVA分析。P＜0.05表示具有统计学差异。结果1.ACLY在ESCC中高表达:TCGA的三个数据库均显示ACLY在食管癌组织中的表达显著高于正常组织;Western blot及q RT-PCR结果也显示ESCC细胞中ACLY的蛋白表达及m RNA水平显著高于Het-1A;此外31例ESCC组织中有23例具有ACLY的高表达,其中16例有显著性差异。2.BMS-303141显著抑制ESCC细胞中ACLY的表达,而ACLY过表达显著促进ESCC细胞中ACLY的表达。BMS-303141可以显著抑制ESCC细胞的增殖、迁移、侵袭和脂质的生成,而ACLY的过表达显著促进ESCC细胞增殖、迁移、侵袭和脂质生成。此外,BMS-303141显著抑制ESCC细胞脂代谢相关酶（ACS、ACC1、FASN、MOGAT2和SREBF1）的表达,而ACLY的过表达具有相反的作用效果。裸鼠移植瘤结果表明,BMS-303141显著抑制肿瘤的生长,并且下调肿瘤组织中的脂质代谢酶的表达,而ACLY过表达具有相反的作用效果。3.Co-IP结果表明ACLY具有乙酰化修饰,并且与去乙酰化酶SIRT2互作;ACLY抑制剂显著抑制SIRT2的表达,而且SIRT2抑制剂也显著抑制ACLY的表达;SIRT2抑制剂AGK2显著增加ACLY的乙酰化水平,并且显著抑制ESCC细胞的增殖与迁移能力,而ACLY的过表达部分逆转AGK2介导的ESCC细胞增殖与迁移的抑制。结论1.抑制ACLY的表达显著抑制ESCC细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭、脂质生成以及脂质相关蛋白的表达,并且显著抑制ESCC裸鼠移植瘤的生长和裸鼠肿瘤组织中脂质相关蛋白的表达,而ACLY过表达具有相反的效果。2.ACLY具有乙酰化修饰并且可以和SIRT2互作。SIRT2抑制剂AGK2显著提高ACLY的乙酰化水平并且抑制ESCC细胞的增殖和迁移,而ACLY的过表达部分逆转该抑制效应。这些结果提示靶向抑制SIRT2/ACLY信号轴可能成为ESCC病人潜在的治疗策略。