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目的：评估纳秒级电脉冲治疗绿色荧光蛋白标记的恶性黑色素瘤细胞(A375-GFP)裸鼠皮下移植瘤的疗效。方法：通过细胞转染技术将带有GFP基因的慢病毒颗粒转染人恶性黑色素瘤A375细胞。荧光显微镜下筛选转染率达100%且荧光信号稳定的复感染指数（multiplicity of infection，MOI），建立稳定A375-GFP细胞株，设为转染组细胞A375-GFP。同时设立未转染组亲代细胞A375。通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法及倍增时间检测两组细胞增殖能力的改变，流式细胞学检测细胞周期分布的差异。建立裸鼠A375-GFP细胞皮下移植瘤模型，随机分为治疗组（n=6）和对照组（n=6）。纳秒脉冲电场(脉宽200ns、场强20kV/cm、频率5Hz，2000个脉冲,4个方位，每隔2d治疗1次，共2次)治疗裸鼠皮下瘤；采用活体荧光成像技术检测裸鼠皮下瘤治疗前、治疗后48h、10d皮下瘤荧光变化；组织HE染色观察评估治疗后90d局部效果；数码相机观察随访治疗后局部疤痕变化。结果：1.成功构建了稳定表达GFP的A375-GFP细胞。2.通过MTT法检测细胞生长72h时OD值发现A375（1.066±0.514）及A375-GFP组细胞（1.023±0.810）比较差异没有统计学意义(P＞0.05)。A375-GFP细胞的倍增时间（28.9±1.51）h与A375细胞（29.04±1.04）h差异无统计学意义(P＞0.05)。流式细胞学检测示两组细胞周期分布差异无统计学意义(P＞0.05)。3.稳定建立了可视化裸鼠皮下A375-GFP细胞移植瘤模型。4.纳秒脉冲治疗裸鼠皮下移植瘤后，活体荧光成像仪检测示治疗组皮下移植瘤荧光强度及面积于治疗后48h大部分减少，至治疗后10d完全消失；对照组则逐渐增加，治疗组与对照组比较，差异具有统计学意义（F=1055.11，P<0.0001）。nsPEF治疗后90d组织HE染色结果证实治疗组所有裸鼠皮下移植瘤完全消失。皮下移植瘤经nsPEF治疗后3-4d,治疗局部区域出现结痂，于2周内脱落，随时间推移，局部疤痕逐渐变浅，且肉眼未见原位新生瘤体。结论：1.通过慢病毒转染可以获得稳定，高效且长期表达GFP的人黑色素瘤株A375细胞。2.慢病毒转染的GFP对A375细胞的增殖能力未见明显影响，可反映亲代细胞的增殖能力，为后续实验研究奠定基础。3.成功构建了可视化裸鼠皮下A375-GFP细胞移植瘤模型，通过电极板4个方向夹取肿瘤，并采用脉冲参数为200ns，5Hz，20kv/cm，2000个纳秒级电脉冲治疗皮下移植瘤2次后可以有效消融A375-GFP裸鼠皮下移植瘤，且疤痕少，操作简单，它可能成为浅表肿瘤临床微创治疗的一种新的途径。