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[目的]构建人多发性骨髓瘤小鼠模型,评价人BCMA-CAR-T细胞对人多发性骨髓瘤的药效作用并确定适当的作用剂量,同时在肿瘤小鼠模型中评价相应的毒性指标,初步观察BCMA-CAR-T细胞的毒性作用。采用新一代原位杂交技术RNAscope检测BCMA-CAR-T的分布,同时用免疫组化的方法检测BCMA的表达,证明RNAscope可应用于CAR-T细胞的组织特异性分布检测。[方法]1、采用生物发光成像法鉴定过表达荧光素酶标记的人多发性骨髓瘤细胞体外发光效率:向MM.1S-Luc细胞中滴加荧光D-luciferin底物使用液,进行Luciferin发光成像拍照,读取图片结果和数据,计算体外发光效率。向重度联合免疫缺陷小鼠中尾静脉注入人源多发性骨髓瘤细胞MM.1S-Luc,建立人多发性骨髓瘤模型,并用生物发光成像法鉴定移植是否成功。2、尾静脉注射CAR-T细胞后,采用生物发光成像法检测CAR-T细胞对多发性骨髓瘤的治疗作用,并检测外周血中相应的细胞因子(IFN-y)间接评价CAR-T的治疗作用。实验期间检测小鼠体温体重,观察小鼠的一般状态,实验结束后解剖小鼠,进行大体解剖观察、取脏器制作病理切片,评价BCMA-CAR-T细胞的治疗作用和毒性作用。3、制作心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肺脏、骨髓和脑等组织的石蜡切片,RNAscope检测BCMA-CAR-T在组织中的分布,将RNAscope阳性结果的组织切片做免疫组化检测BCMA在组织中的分布。[结果]1、经计算MM.1 S-Luc细胞体外生物发光效率达99%。向NSG小鼠中尾静脉注入MM.1S-Luc细胞,移植后第18天,生物发光成像法鉴定模型构建成功:实验组小鼠体内均检测到肿瘤细胞发光,且肿瘤细胞发光强度均一(p>0.05)。2、生物发光活体成像结果表明,在BCMA-CAR-T细胞注射后第3天起即显现出明显的治疗作用:对照组肿瘤细胞发光颜色加深,发光强度增加,且细胞外液组的肿瘤细胞发光强度明显高于CAR-T治疗组(p<0.05)。其中中剂量和高剂量CAR-T的治疗效果均优于低剂量组(p<0.05)。细胞治疗后第3天,IFN-y等细胞因子大量释放,随后立即减少,间接反应了 BCMA-CAR-T的作用效果。非治疗组的小鼠体重减少,出现四肢瘫痪、消瘦、毛发稀疏等体征,而CAR-T治疗组小鼠体重自然增长,未出现异常临床体征,未出现GVHD反应。大体解剖观察细胞外液组有多发性骨髓瘤细胞和肿瘤转移,CAR-T治疗组未见异常。因此CAR-T细胞可以快速缓解多发性骨髓瘤,无明显毒性作用。3、RNAscope检测结果表明,BCMA-CAR-T细胞的阳性信号表达在浆细胞表面和B淋巴细胞表面,将RNAscope阳性信号的组织切片做免疫组化检测BCMA抗原,结果显示BCMA抗原的阳性信号也表达于浆细胞表面和B淋巴细胞表面。初步证明RNAscope可以用来检测CAR-T细胞的分布,可将RNAscope用于检测CAR-T代谢和靶向分布的方法之一。[结论]BCMA-CAR-T细胞具有明显的抗多发性骨髓瘤作用,但易复发。安全性可被监测,无明显毒副作用。RNAscope可用于检测CAR-T细胞在组织中的分布情况。