转小麦转录因子基因水稻的获得及其抗逆性筛选分析

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wang9230c
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农作物在生长发育过程中,常常不可避免的受到不同环境条件各式各样的生物和非生物胁迫,这些逆境条件会严重影响农作物的产量和品质。20世纪80年代以来,利用基因工程技术在改良作物抗胁迫性能方面的广泛研究应用,为抗逆性能良好新品种的培育提供了新的方法手段。在由胁迫感应信号传导到胁迫应答基因的信号传导网络中,转录因子(TFs)扮演着一个必不可少的角色。其中MYB、MYC、ERF、bZIP和WRKY等转录因子家族已被证实与胁迫应答调节相关。利用转录因子胁迫信号的生物工程学研究来研制耐胁迫植物已成为现代分子生物学研究的热点。小麦作为全世界人类最重要作物和粮食来源之一,一直是基因工程的研究重点,可由于其基因组的复杂性与转化的困难性,研究进展颇为缓慢。而另一主要作物水稻的研究进展飞速,已发展成为基因工程研究的模式生物之一。故本文借助Takanari(2006)等发明的FOX hunting system方法原理,将获得的小麦转录因子全长cDNA转入到水稻中,构建转基因水稻群体,通过研究转基因水稻群体后代从而研究相关基因的功能作用。本文主要对转基因后代在干旱和高盐胁迫下的表型变化进行研究筛选,以求获得抗旱性和耐盐性能良好的水稻品种。对于获得的约1500个小麦转录因子全长cDNA,如果按照传统的载体构建方法,则需要大量繁琐的酶切与连接工作。而利用Gateway技术,不但可以极大简化表达载体的构建步骤,而且可以保证高效的克隆效率。通过两步BP和LR两步主要反应构建双元载体,然后经基因枪介导的GUS基因瞬时表达验证,证明了载体的有效性。农杆菌侵染法将目的基因转入到水稻中。获得转基因后代群体。对部分T2转基因植株进行分子鉴定,部分结果送去测序,并对测序结果进行相应分析。本文采用20%的PEG4000溶液进行模拟干旱条件,而高盐处理则选用150mM的NaCl溶液。通过对于约10000份转基因后代进行两次筛选,再加上进一步的分析验证,最后得到了9个抗旱和耐盐性能较强的转基因品系。PCR扩增证明了目的基因的转入,而RT-PCR也证明了所转入基因的表达。并利用相关生物信息学工具去这些基因的序列与功能进行了简单的分析。而这些基因在水稻中的具体作用机理还需要进一步的研究阐明。
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